• Forum - But, Protéine, Cellule

[Biologie Moléculaire] spectro de masse: question pour une experience

Le but étant de comparer entre une protéine de cellule X chez l'enfant le profile de glycosylation (de la dites protéine donc) avec la même protéine de la cellule X de l'adulte.  [...] J'avais posé la même questions aux personnes qui s'occupent du service de mass spec de mon labo. Ils m'avaient répondu qu'à partir du moment où tu peux observer ta bande dans un gel coloré aux sels d'argent c'est OK. C'est un peu empirique mais ça représente vraiment peu de protéine (l'ordre de grandeur doit être du nanogramme).  [...]

Les inhibiteurs de la neuraminidase et la grippe

L'ADNc c'est l'ADN complémentaire c'est à dire l'ADN codant pour la protéine en question (rétro transcrit à partir du mRNA correspondant). La transfection est l'introduction, via un vecteur (plasmide par exemple), de cet ADNc dans une cellule qui n'exprime pas initialement ce gène (mais tu peux très bien transfecter le gène A dans une cellule qui possède déjà le gène A, ça n'a pas d'importance).  [...] On l'utilise par exemple dans le but de faire produire la protéine par la cellule transfectée (mais ça n'est qu'un exemple), ou de voir l'expression d'une protéine exogène ou mutée sur la physiologie cellulaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Qu'est ce qu'une purification de protéine

Bonjour, juste pour savoir si quelqu'un peut me répondre, qu'est ce qu'une purification de protéine. Impossible de trouver une définition claire.  [...] La purification permet d'isoler la protéine qui t'intéresse. Concrètement, ta protéine se trouve à la base dans une cellule, qui contient des milliers d'autres protéines, et le but est de récupérer uniquement celle qui t'intéresse. Pour cela, on utilise différentes techniques comme la centrifugation et la chromatographie.  [...]

[Génétique] exprimer une protéine dans E.COLI

Mais, tu va devoir modifier ton transcrit d'ADN c de départ pour par exemple utiliser les ARNt que la bactérie utilise le plus souvent, et aussi, tu peux, par PCR, ajouter une séquence à ton plasmide permettant de secréter la protéine dans l'espace périplasmique ou extracellulaire.  [...] Dailleurs, je rajouterai aussi que si ton but est la production de protéines, les procaryotes c'est pas tip top car ils ne vont pas faire les modifications pos traductionnelles nécessaires, donc tu peux essayer de produire la protéine dans une cellule de levure, mais les modif' post-trad n'y sont quand meme pas géniales.  [...]

[Biochimie] Réplication ADN

Je ne saurai répondre à toutes tes sous-questions, mais la réplication a lieu dans toutes les cellules qui se divisent (cellules de la peau, de l'intestin, tous les jours). Le but est d'avoir 2 fois l'ADN (1 pour chaque cellule). Je dirais sans confirmation que toutes les cellules ont la potentialité de se diviser mais qu'une partie le fait régulièrement (je pense aux neurones par exemple, qui ne doivent plus trop se diviser une fois l'âge adulte atteint).  [...] Et la transcription (suivie de la traduction) permet de lire et d' exprimer l'information contenue dans l'ADN. Donc ce sont 2 événements différents de la réplication, ici, le but, c'est de produire une protéine par exemple (qui servira au bon fonctionnement de la cellule).  [...]

Adénylate Cyclase, Protéine G et... Prise de tête....

Le prob c'est qu'on nous a refilé un exo, où la protéine Gi de part ses particules Beta/Gamma, quand elle est dans une cellule présentant également des protéines Gs deviendrait activatrice de l'adénylate cyclase. Est-ce que c'est possible, car vu comme c'était posé dans l'énnoncé je pensais que le but de l'exo était de démontrer que ce postulat est faux, mais en le faisant j'arrive à cette conclusion aussi... Est-ce que quelqu'un pourrait m'aiguiller.  [...] Alors il y a 2 choses importantes avec les protéines G, d'abord, comme ça a l'air d'être le cas ici, ce n'est pas forcément la particule alpha qui est activatrice mais il peut s'agir des deux autres (liées ensemble je crois). je ne sais pas si ce que j'avance est incontestable car les modes d'activation des protéines G sont, il me semble, pas parfaitement connus.  [...]

[Biologie Moléculaire] bio mol

on a isolé une protéine qui est beaucoup plus abondante dans les cellules cancéreuses que dans les cellules normales. On pense que cette protéine est un facteur de transcription et on veut en savoir plus sur sa fonction. Quelle stratégie expérimentale choisir dans le but de comprendre le rôle de cette protéine.  [...] De plus votre titre n'est absolument pas explicite. Je vais fermer cette discussion dans l'attente d'un nouveau titre que vous pourrez me communiquer par message privé.   [...]

les gènes candidats

Bonjour, je suis en master de biologie et mon prof de biologie moléculaire a voulu nous expliquer une approche dont je n'ai pas compris le but. Il dit que l'on part d'une protéine possedant des domaines spécifiques et que l'on cherche l'ARNm qui code pour cette protéine pour ensuite regarder si cet ARNm est exprimé dans certaines cellules (même si ce serait plus facile de voir si la protéine s'y trouve.  [...] Mais, ensuite pour retrouver le bon ARN, il dit qu'on l'hybride à haute stringence avec l'ARNm de la protéine Alors a quoi ca sert de chercher l'ARNm si on l'a déjà... C'est peut être celui d'une autre espèce... j'ai pas compris et il n'a rien expliqué de plus.  [...]

[Biologie Cellulaire] Co-Immunoprécipitation

Evidemment tu auras ta proteine connue (tu t'en ai servipour la precipitation) mais tu auras aussi des inconnus qui va te falloir reveler par differentes methodes (electrophorese/ MS etc etc etc).  [...] Tu peux aussi immunoprécipiter avec un anticorps anti C (autre protéine connu pour ne pas interagir avec A ni B), et vérifier la présence de A ou B. Si tu détectes A ou B, cela signifie que tu as une fixation aspecifique de ta protéine sur les billes, que tes lavages n'étaient pas bons.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot difficile d'une protéine de réparation de l'ADN

Dans le but de mettre en évidence des différences dans l'expression de la Poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) (une protéine de réparation de l'ADN) chez des cellules soumises à différentes concentrations de drogue X, j'effectue des Western Blots.  [...] Suite à quelques problèmes (impossible de mettre en évidence ladite protéine), j'ai décidé d'inclure une étape de sonication pour découper l'ADN des échantillons cellulaires.  [...]