• Forum - Buffer, Solutions, Préparation

problème de western blot

Merci de ton intérêt à mon problème. J'ai fini par le résoudre, la canicule a fait précipité le tris contenu dans le running buffer et dans les solutions de preparation des gels. Quasi invisible à l'Sil ça n'a pas été une mince affaire.  [...] Au moins tu as appris une belle leçon, refaire toutes les solutions quand quelque chose ne fonctionne pas... et surtout ne pas chercher à savoir pourquoi soudainement ça ne marche plus... c'est souvent une perte de temps.  [...]

Sds-page

Je me demande si le SDS à un rôle différent selon sa concentration, ou son utilisation (en tampon ou en gel). Est -il possible qu'en plus de charger négativement les protéines, il les dénature plus ou moins suivant ces critères.   [...] Oui je sais, on peut aussi utiliser du DTT qui est non hépatotoxique et inodore pour les dénaturer. Mais je me demande pourquoi on utilise du SDS dans le tampon ET dans les gels. Ne pourions nous pas mettre du SDS en plus forte concentration dans le tampon et attribuer la charge du gel de concentration et du gel de migration simplement avec des solutions de Lower buffer et Upper buffer sans SDS (Trizma base + Acide chlorhydrique pour ajuster le pH souhaité).  [...]

pb dépots echantillons d'ARN

En general cela se produit quand on s'est trompé de tampon d'electrophorese, typiquement quand on utilise une solution 10X au lieu d'1X. Sinon il peut rester des traces d'alcool dans l'echantillon ce qui fait remonter l'echantillon a la surface... un grand classique aussi.  [...] - Mélanger x ml de tampon TE 1x avec x ml de lysozyme à 10mg/ml (à -20°C) dans une tube Eppendorf biopur de 1,5 ml afin d'obtenir une solution à 5mg/ml de lysozyme.  [...]

test Elisa

- tous les autres réactifs (wash buffer, solution de révélation...).  [...] Tout les contrôles du kit Elisa se font avec des réactifs livrés avec le kit Les laboratoires par exemple, au lieu de prendre leur propre réactif (ex. sérum positive à une maladie) ils prendront les réactif livrés avec le kit.   [...]

[Biochimie] Lysis buffer

Je voulais savoir si il était envisageable de mettre le triton x-100 dans la solution 5x à l'avance sans en perturber l'efficacité, en effet lorsque je prépare mon buffer le triton est dilué 1000x -. un peu chiant à pipetter vous imaginez... 5ul d'un truc tout gluant c'est pas top top et pas précis du tout.  [...] En fait, il faut vous préparer un stock de triton 10% voir 5%. Ainsi vous ne pipettez pas pour la constitution de ce stock. Ensuite quand vous préparez votre buffer, vous pipettez de plus gros volumes d'une solution bien plus fluide.  [...]

[Biologie Cellulaire] Comment dissoudre la Collagenase

enzyme stock solution is prepared by dissolving 0.05 - 0.1 mg/ml collagenase in 50 mM TES buffer, pH 7.4, containing 0.36 mM calcium chloride.  [...] To make 5% stock solution, dissolve 1 g of collagenase type I (Sigma, cat. no. C-2674) in 20 mL phosphate-buffered saline (PBS). Store at 20°C in single use aliquots of approx 0.5 mL. Make up 0.25% collagenase working solution by diluting stock solution 1.  [...]

[Immunologie] Problème ELISA direct avec les puits non coatés

Et question subsidiaire parce que j'ai déjà eu un soucis comme ça et que j'ai mis du temps à trouver d'ou ça venait. qu'utilise tu comme blocking buffer.  [...] Ce message est un peu vieux mais comme j'ai le même problème et que je travaille avec des peptides de taille identiques (pas plus de trente AA), j'aimerias en savoir plsu sur la solution mise en oeuvre. Pour l'instant j'utilise des plaques streptavidine prébloquées au superblock mais le bloquage ne semble pas suffisant.  [...]

[Immunologie] pbs

quel est l'interet de PBS dans le dosage d'anticorps dans le serum.   [...] Le PBS (ou Phosphate Buffer Saline) est un tampon phosphate salé il sert à stabiliser le pH de la solution.  [...]

Pourquoi le tampon Tris réagit-il avec les amines primaires?

Seulement, au moment de commencer mes préparations, j'ai remarqué une petite phrase bien gênante. Tris buffer reacts with primary amines. Et je vous laisse deviner quelle fonction on peut trouver sur ma molécule.  [...] le seul effet du tris dans cette affaire serait d'amener la solution à un pH où le persulfate n'a pas la même stabilité que d'habitude (dis-nous si tu prépares tes gels à ce même pH les autres fois).  [...]

[Biochimie] croissance sur boite de pétri

Je le dilue avec de l'eau, une solution buffer Il est préférable que le coule l'agar après avoir déposé quelques gouttes de la solution pour compost, non.  [...] Sinon le mieux est de reprendre ton composte dans une solution isotonique, puis de couler des différentes boites (chacune ayant une spécificité pour certains organismes). tu ne veux que des bactéries aucun champignons.  [...]