• Forum - BSA, Sites, Intérêts

[Biologie Moléculaire] Western blot

J'ai une question qui va sans doute paraître naïve mais tant pis alors la voilà. Dans un Western blot par exemple, il y a une étape après l'électrophorèse dite de blocage qui consiste à saturer (souvent avec de la caséine ou du BSA) les sites non spécifiques, ce que je comprends bien dans le principe.  [...] Elle se fixe aussi sur les sites spécifiques, mais l'anticorps a une affinité plus grand pour ces sites et déplace donc la protéine aspécifique pour s'y fixer. Ce qui n'est pas (moins) le cas avec le sites aspécifiques.  [...]

[Biologie Cellulaire] Manip de co-IP??? what's wrong!!!

ce qui me contrarie c'est que je révèle cette enzyme aussi bien des culots d'IP d'intérêt que dans le contrôle négatif. J'ai refait la manip au moins 5 fois et c'est tj le même résultat. D'après vous, comment vous expliquez cela... sachant que mon lysat cellulaire totale est toujours traité par la benzonase (pour dégrader l'ADN).  [...] Il y a autre chose qui pourrait expliquer le problème. satures-tu tes billes protéine G sépharose avec de la BSA Certaines protéines se fixent sur la sépharose et/ou sur les protéines G. Une étape de saturation peut donc s'avérer nécessaire pour masquer les sites potentiels d'interaction non spécifique.  [...]

[Biologie Moléculaire] BSA et saturation

Aussi pour la technique de cytométrie en flux, on peut donc comme pour les autres techniques utiliser la BSA pour saturer les sites non spécifique à la place des immunoglobulines.  [...] Maintenant, dans le cas d'ELISA, elle servirait à empêcher les interactions non-spécifiques des anticorps avec les bords des plaques qui sont très hydrophiles. Donc, durant la première étape, tu laisses ton antigène se fixer au fond des plaques. Puis tu ajoutes la BSA afin de combler les espaces vides.  [...]

[Biologie Cellulaire] pbs et pbs tween

- as a washing agent in immunoassays, such as Western blots and ELISAs. It helps to prevent non-specific antibody binding. In this major application, it is dissolved in Tris-Buffered Saline or Phosphate buffered saline at dilutions of 0.05% to 0.5% v/v. These buffers are used for washes between each immunoreactions, to remove unbound immunologicals, and eventually for incubation solutions of immunoreagents (labeled antibodies) to reduce unspecific background.   [...] Après, j'ai des souvenirs comme quoi le tween agirait également avec la PFA (sur les sites encore actif de cette dernière) pour prévenir une interaction non spécifique.  [...]

[Biochimie] La BSA

La BSA est principalement utilisée soit pour bloquer les sites aspecifiques sur les membranes lors des western-blot, et comme stabilisateur dans les réactions enzymatiques.  [...] La BSA est utilisée, comme dit Yoyo, pour le blocage des sites aspécifiques lors du Western, aussi pour faire des gammes étalon lors de certains dosages (Bradford), aussi je l'ai utilisée pour diminuer mon bruit de fond lors d'hybridation sur microarray, parfois elle peut être aussi utilisée en tant que témoin de charge (dans des gels).  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation in situ et digoxygénine

Fixation au formaldéhyde (+ coupes si l'organisme n'est pas étudié in toto ) =. Perméabilisation (traitement à la protéinase K) =. Hybridation (ajout de la sonde ARN complémentaire) =. Lavage (élimination des sondes qui ne complémentent pas) =. Saturation des sites anticorps anti-digoxygénine =. Révélation (phosphatase alcaline etc.).  [...] De plus, pourquoi faire la saturation des sites Ac anti-digoxygénine après l'hybridation et le lavage alors qu'en immmunodétection on sature (à la BSA par exemple) avant l'incubation avec l'Ac primaire.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Mais lorsque je dose ensuite mes protéines extraites, la BSA est utilisée dans la gamme étalon. Dans quelle mesure la BSA présente dans mes extraits (puisque dans le tampon d'extraction) ne va pas fausser la quantification des proteines extraites par la suite.  [...] oui 1% c'est pas rien. Faut tenir compte de ça. Ma seule idée c'est celle de l'extraction à blanc, comme ça tu récupères autant de BSA que dans les échantillons. Sauf si tu as besoin d'une activité relative ou dans ce cas tu ne prends pas en compte l'activité absolue en fonction de la quantité de protéine totale.  [...]

Problème de traduction publication.

Microbial cDNAs are then selectively captured by hybridization to biotinylated microbial genomic DNA that has been prehybridized with blocking microbial ribosomal DNA (rDNA) fragments.   [...] On parle ici d'ARNr bloquants car, comme dans toute hybridation (ELISA, Western, Southern...) on previent toute liaison non specifique en saturant les sites de fixation aspecifiques avec des generiques (proteines de lait ou BSA pour ELISA et Western, ARNr ici).  [...]

[Biologie Moléculaire] DOT Blot quantitative

tu parles de protéines ou d'acides nucléiques Pour limiter les hybridations non spécifiques, on sature les sites potentiellement capables de lier ta sonde ou ton anticorps, avec des protéines du lait ou de la BSA pour les portéines, avec des polymeres comme le DIDC ou de l'ADN de sperme de saumon ou de hareng pour les acides nucléiques.  [...] Par rapport à l'annalyse des images, il y a de nombreux logiciels, souvent fourni avec le matériel de capture, qui permet de sélectionner manuellement ou automatiquement des zones de dépot, et ensuite d'évaluer des quantités par densitométrie.   [...]

[Biologie Moléculaire] immunohistochimie sur rein de souris

Je dois faire une immunohistochimie sur des sections de rein de souris. J'utilise un protocole où je masque avec de l'eau oxygénée la péroxidase endogène puis je bout les sections dans du citrate de sodium pour réveler l'antigène. Je bloque avec de la BSA/PBS dans laquelle j'ai de la streptavidine puis le premier anticorps avec de la biotine dans la solution.  [...] es-tu sûre d'avoir besoin de l'étape d'antigen retrieval en citrate de sodium pour avoir un signal De plus, as tu fait les contrôles adéquats (sans ACI ou ACII) pour t'assurer que le problème vient bien de l'étape d'incubation en DAB.   [...]