• Forum - BSA, Protéine, Enzyme, Action

Saturation BSA pour purif de protéine His-tagged

Non mais je pense que je me suis mal exprimé... Je retrouv ebien la liaison là où je dois l'avoir donc pas de problème à ce niveau là. Mon souçis vient du fait que là où je ne peux pas avoir d'interaction avec une protéine His taggée (vu que je ne l'ai pas transfectée et qu'elle n'est pas assez présente dans la cellule à l'état endogène), je descend quand même ma protéine non liée à une 6His.  [...] Ben si... conceptuellement ça me gène. Tu obtients la protéine qui n'a pas la modification que tu étudies en utilisant un système qui normallement ne doit sélectionner que les protéines portant cette modification...donc tu es en droit de te poser des quetsions sur le reste.  [...]

Problème de traduction publication.

Microbial cDNAs are then selectively captured by hybridization to biotinylated microbial genomic DNA that has been prehybridized with blocking microbial ribosomal DNA (rDNA) fragments.   [...] On parle ici d'ARNr bloquants car, comme dans toute hybridation (ELISA, Western, Southern...) on previent toute liaison non specifique en saturant les sites de fixation aspecifiques avec des generiques (proteines de lait ou BSA pour ELISA et Western, ARNr ici).  [...]

[Biotechnologie] Ogm

Il y a belles lurettes que je n'ai plus fais d'elisa à la main donc là je n'ai plus de protocole précis. Pour les PCR c'est assez simple. Un mix 10 mM dNTP, BSA 1µg/µl, une paire d'oligos nucléotides dirigés contre votre gène d'intérêt (un sens et un anti sens), pour des 20 mer on mets 5 ng/µl.  [...] Vous mettez tout cela ensemble dans un tube et en route pour le thermocycler pour entre 25 et 40 cycles. Le réglage dépend de vos oligos et de vos attentes. Classiquement on a un préchauffage à 95°C durant 2-5 minutes. Puis les cycles (dénaturation 95°C 30 secondes, hybridation 60°C 30 secondes, et élongation 72°C 30 secondes).   [...]