• Forum - Boîte, Colonies, Transformation

[Biologie Moléculaire] m-x!

bonjour, j'ai une question concernant l'ecriture, par exemple quand on veux cloner un gene d'une proteine x dans un vecteur de clonage, l'ecriture de ce gene est la suivante. m-x. le m est fé reference à quoi merci d'avance.   [...] en fait c'etais le clonage de EBI3 (sous-unité d'une interleukine) et aussi d'autre genes et dans la boite ou les colonies poussent après la transformation s'est ecri m-EBI3 pareil pour les autres genes.  [...]

[Biologie Moléculaire] cellules compétentes DH5a

en vu de clonner un fragment de gene, jai commencé par préparer des cellules compétentes DH5a, par traitement avec la glace. 20min dans la glace suivies par des lavages avec le glycerol. Aprés la transformation par électroporation, j'ai trouvé des colonies sur la boite LB+Amp de controle négatif( cellules DH5a sans vecteur) sur les autres boites LB+ Amp+ IPTG+ X-Gal j'ai trouver des colonies blanches et des colonies bleu.  [...] le vecteur possede un gene de resistance a l'ampicilline et apporte donc la resistance à l'ampicilline quand il transforme une bactérie DH5a. Or si la bacterie est deja resistante a l'ampicilline avant la transformation, tu ne peux pas distinguer les bactéries transformées des bacteries non transformées resistantes à l'ampicilline.  [...]

[Microbiologie] Les différents systèmes de comptage de colonies en boîte de Petri

je viens de commencer mon mémoire de fin d'etudes qui porte sur l'analyse et le comptage de colonies (bactéries) dans une boite de petri,et j'aimerais juste avoir quelques informations sur les différents systèmes ou méthodes de comptage de colonies en boite de petri, et lesquelles, svp.  [...] Parfois, quand il y a trop de colonies mais qu'il faut quand même compter, on considère que la répartition sur la boite est homogène et on ne compte qu'un demi, ou qu'un quart des colonies puis on multiplie par 2 ou par 4.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

- l'efficacité de transformation obtenue avec le produit de ligation. nombre de colonies / µg d'ADN de plasmide digéré incubé avec insert et ligase.  [...] La seule chose que je peux te dire c'est que la manip de transformation des bactéries par le vecteur seul a raté, et qu'un très faible nombre de colonies a donc pu se développer. Par curiosité, combien de colonies par µg d'ADN as tu obtenu dans le contrôle et dans la transformation avec vecteur + insert.  [...]

[Divers] Bactéries

Pour faire le dénombrement de bactéries,on fait différentes dilutions de rapport 10 et ensuite on met cultiver ces solutions dans des boites de Pétri.Plus la dilution augmente, moins on aura de colonies sur la boite.  [...] Méthodes de dénombrement bactérien. Tout va être basé sur des méthodes de dilution car on ne peut pas compter les bactéries sur un champ s'il y en a 1 milliard par exemple. Il faut diluer pour avoir quelques bactéries par champ. C'est la même chose sur une boîte de Pétri, si on a plus de 1000 colonies, on ne peut plus compter car on a une nappe de bactéries, de colonies qui sont confluentes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

Est-ce que vous rajoutez bien la BSA qui est nécessaire pour un clivage optimal par Sfi1 Quel contrôles intra-manip avec vous fait (contrôle de clivage par l'enzyme, de recircularisation du vecteur,...) Quelles bactéries utilisez-vous pour la transformation Avez-vous fait le contrôle de base nécessaire sur la transformation des bactéries. transformation avec un plasmide contrôle.  [...] Pour déterminer approximativement le nombre de bactéries transformées dans un volume donné, tu ensemences un volume donné de ta suspension bactérienne. Après étalement sur boite tu comptes le nombre de colonies formées et tu en déduis le nombre de bactéries transformés dans ta suspension en le multipliant par le facteur volume total/volume prélevé, tout simplement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagenèse par PCR : Tm des oligos

Etes vous certain que c'était bien du pGLO une manip très simple pour savoir c'est de transformer des bactéries avec du pGLO, de les étaler sur boite de Pétri et ensuite de mettre la boite de Pétri au dessus d'un trans-illuminateur, les colonies devraient devenir vertes.  [...] Justement la suite du TP était une digestion par Dpn1 et après de transformer des bactéries avec ce produit de PCR. nous avons eu quelques colonies mais pas assez de temps pour les laisser grossir et pouvoir voir qu'elle étaient vertes ou bleues, et en plus on était pas équipé pour le voir.  [...]

[Biologie Cellulaire] Exercice Bio PCEM1

On calcule déjà la moyenne des colonies par boîte. le calcul nous donne 11 colonies.. mais après je ne vois pas comment il faut faire.  [...] Pour concentration la culture, il est probable que la culture C ait été centrifugé. les colonies ont donc été culottées au fond d'un tube et resuspendues dans du milieu de culture, dans un volume 5x plus petit que celui de C (c'est cela que signifie concentrer une culture ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

J'ai testé les différentes propositions que vous m'avez faites. J'ai pu obtenir des colonies ce matin. Seulement, il y a un souci, j'ai des colonies dans ma transformation témoin (bactéries transformées avec le vecteur ligaturé sur lui même). Je vais prendre le pari ce matin et essayer de faire des PCR de colonies pour voir si les fragments d'intérêt on bien été cloné.  [...] j'ai fait des recherches sur le kit in-fusion. Je pense que je l'utiliserai bien en dernier recours. Avant tout j'ai pas envie de laisser tomber aussi facilement sans savoir ce qui cloche. Aussi j'ai une autre question qui va d'une observation. A chaque fois (plus de 10fois) que j'ai fait des ligations vecteur d'expression pET45b + inserts d'interet (1330bp, 1894bp et 958bp) après transformation des Top10 puis étalement sur boite j'obtient toujours moins de colonies bactérienne dans la transformation effectuée avec l'insert de 1894bp quand bien même j'ai mis la même quantité de vecteur dans chaque produit de ligation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème lors de la transformation avec DH5a E.coli.

Malheureusement, le lendemain aucune colonie sur les boîtes. J'ai refais toutes les manipulations plusieurs fois et je ne sais pas si s'est un problème lors de la ligation ou de la transformation.  [...] 1 contrôle de transformation, avec une dizaine de picogrammes de pUC18 ou équivalent pour des bactos électrocompétentes qui sont attendues à une efficacité de 10^8 colonies par ug de plasmide.  [...]