• Forum - Biologie moléculaire, Température, Base

[Biologie Moléculaire] Melting temperature basic ou base-stacking?

Il y a de nombreuses façons de calculer un TM, qui dépend à la fois de l'oligo et des composants du milieu réactionnel. Pour cette raison, il est préférable de commencer plus froid, et d'augmenter le TM en cas de produit non spécifique. L'idéal étant de travailler sur une machine a gradient qui permet de faire dans le même run une hybridation sur une gamme de température prédéfinie, permettant ainsi de choisir la meilleure.  [...] Peut être pas descendre aussi bas mais dans ce cas, prends la température la plus basse, tu es sur d'amplifier. Après si ton échantillon est complexe et tes amorces peu spécifiques, tu pourras essayer d'augmenter ta température.  [...]

[Génétique] On n'hérite pas que de l'ADN

Bon... je crois que toutefois la transmission par la mère est plus facile. dans le spermatozoïde l'ADn subit des modifications profondes, et il n'y a pas possibilité (il me semble) d'embarquer des facteurs de transcription ou autres molécules qui peuvent modifier l'expression des gènes.  [...] Un an plus tard, une équipe allemande du Centre de biologie moléculaire d'Hindenburg tente une autre expérience sur la drosophile. Des embryons de cette mouche sont exposés durant une heure à une température de 37°C. Soit près de 20°C de plus que la température normale à laquelle se développent les larves.  [...]

[Biologie Cellulaire] Enzymes et ARN

...une simple réponse à ta question NON, c'et contraire à la formule qui dit, deux enzymes similaires= structures chimiques et moléculaires similaires...tout simplement...vous aurrez compris que la différence est dans la structure et la fonction intranucléaire.  [...] de la température et de beaucoup de chose plus compliquées encore...qui entre dans le domaine de la biologie nucléaire et pas seulement moléculaire...vous comprenez il n'est que réçament que l'on pense ainsi et une autre information, chaque enzyme a sa propre methode d'agir.  [...]

[Biologie Moléculaire] extractiobn d'ADN plasmidique

J'ai eu un question dans le TP de biologie moléculaire dans ce qui conserne la méthode d'éxtraction de l'ADN plasmidique et la détermination de la température de fusion c'est que c'est quoi le rôle du sel dans la solution.  [...] La soude est ensuite neutralisée par de l'acétate de potassium (KAc) 1M en concentration finale (ajout de 1.5V d'une solution de KAc 3M.). Ceci induit la renaturation des macromolécules. L'ADN génomique et la plupart des protéines sont des molécules trop grosses pour retrouver leur conformation native et toutes ces molécules établissent des liaisons les unes avec les autres, formant un précipité blanchâtre Le plasmide étant petit il retrouve sa conformation native, est exclu du précipité et reste en solution.  [...]

[Biologie Moléculaire] Température d'hybridation et MacVector

J'ai désigné deux amorces avec le logiciel MacVector pour faire une réaction PCR. La première amorce sens est de 27 bases et la deuxième antisens est de 21 bases. Lorsque j'ai fait le test des amorces par MacVector, il m'a dit que c'est bon pour les deux amorces et que la température de fusion Tm est de 62,1 pour les deux, et donc je peux conclure que la bonne température d'hybridation est 57,1.  [...] Mais, lorsque j'ai essayé de calculer la température d'hybridation par la fameuse formule 4(G+C) + 2(A+T) j'ai trouvé des températures d'hybridation de 69 pour l'amorce sens et de 61 pour l'amorce antisens. Je demande qui est le plus crédible. MacVector ou la formule classique.  [...]

[Biologie Moléculaire] calcul de la température d'hybridation

[Biologie Moléculaire] calcul de la température d'hybridation.  [...] je veux effectuer une PCR mais le probleme se pose dans le calcul de la température d'hybridation des amorces, en attente de votre aide je vous remercie.  [...]

[Biologie Moléculaire] Température de fusion de l'ADN (Tm)

Il suffit de voir les derniers articles sur cette question. la plupart des molécularistes mettent 55 ou 57°C en température d'hybridation même si leurs amorces devraient beaucoup plus haut.  [...] Mettre une température plus basse n'est pas très embêtant sauf pour un point, on augmente le risque de mésappariement et donc d'avoir des faux positifs.  [...]

[Biologie Moléculaire] Besoin explication température d'hybridation

pourtant la température d'hybridation utilisée dans le thermocycleur varie de 59 à 45 °C (intervalle de 1 °C a chaque cycle), alors que j'aurais pensé qu'il fallais une Ta de 63°C.  [...] En PCR on cherche à ce que le maximum d'amorces soient hybridées (dans l'idéal 100%). Alors on se place générallement 5°C (voir plus) en dessous du Tm (c'est la température d'annealing ou Ta).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR : bandes aspécifique et température

J'ai commencé avec une température d'hybridation volontairement inférieur à celle du Tm de mes amorces car j'ai amplifié un autre insert dans le même programme de PCR.  [...] Finalement à ma surprise, avec une temperature plus élevée la bande correspondant à mon insert est d'intensité plus faible (normal, je diminue l'efficacité) mais ma bande aspécifique est quand à elle devenu très élevé, son intensité est bien plus élevé que celle de mon insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et température d'hybridation

Cette étape (généralement 2 à 60 secondes à 56-64°C) permet aux amorces sens et anti-sens de s'hybrider aux ADN matrice grâce à une température qui leur est thermodynamiquement favorable. Peu de brins d'ADN matrice peuvent s'hybrider (se lier) avec leur brin complémentaire, ce qui empêcherait la fixation des amorces, car ces dernières sont bien plus courtes et en concentration bien plus importante.  [...] Expérimentalement, il est constaté que la PCR fonctionne même avec une phase d'hybridation avec une température supérieure de quelques degrés au Tm théorique des amorces, probablement parce qu'elles interagissent déjà avec les polymérases, qui stabiliseraient leur hybridation à l'ADN matrice.  [...]