• Forum - Biologie moléculaire, Recherche, Amorces

[Biologie Moléculaire] Recherche amorces pour PCR

Je fais un travail de recherche sur un gene, et j'ai besoin de trouver des amorces pour faire une PCR sur ce gene.  [...] Va sur NCBI ( http.//www.ncbi.nlm.nih.gov/ ) Sur la barre Search, tu prend Gene (à la place de All Database), puis après tu rentre le nom de ton gène avec le genre et l'expèce chez qui tu cherche le gène.   [...]

[Biologie Moléculaire] Amorces peu consommées après PCR

Je ne vois pas sur quoi jouer (température, etc...). La bande correspondant à ma séquence d'intérêt est très faible. Donc, c'est que mon couple de primers fonctionne (puisqu'il y a bien amplifcation de la séquence attendue) mais le rendement est faible. J'ai respecté les consignes du kit (conc.   [...] Et bien j'utilise des primers à la concentration de 0.5 microM et l'enzyme à 1 X. D'après le kit je suis à des concentrations moyennes dans l'utilisation de mes primers. J'ai déjà diminué la température et ça m'a donné le même résultat.   [...]

[Biologie Moléculaire] PCR : mauvaises amorces!

Dans mon cours de biologie moléculaire on m'a donné des produits PCR à trouver à partir de différentes paires d'amorces, toutes sens/anti-sens... Sauf une paire, qui est un piège, car les deux amorces sont sens.  [...]

[Biologie Moléculaire] Temps d'hybridation des amorces

Cependant, moi j'ai une petite question, savez-vous combien de temps une amorce s'hybride à un brin d'ADN (Ordre de grandeur, afin que je puisse la comparer au temps que met deux brins d'ADN à s'hybrider).  [...] Le temps d'hybridation est longueur-dépendant et température dépendant. Donc précise la taille de tes amorces ainsi que la température utilisée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amorces PCR et mutagenèse dirigée

[Biologie Moléculaire] Amorces PCR et mutagenèse dirigée.  [...] Bonjour, j'ai des problèmes d'ordre pratique avec la réalisation d'une mutagenèse dirigée par PCR, en effet dans le II) Amorces PCR et PCR du document joint, je n'arrive pas à faire les amorces car je ne sais pas où les placer, au début et à la fin du gène d'intérêt Ou sur l'acide aminé à modifier.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage par PCR taille des amorces

Je me demandais donc la taille que devait faire mes amorces de PCR, et si je dois prévoir quelques bases entre le début (et la fin) de ma séquence codante et mon site de restriction. Car je me demandais si en juxtaposant les 2 sans rien ajouter entre, est ce que la coupure/ligation ne va pas endommager ma séquence codante.  [...] En revanche on conseille de rajouter quelques bases entre le le site et l'extrémité 5' de façon à internaliser le site car les enzymes de restrictions sont des ENDOnucléases, il faut que leur cible soit au milieu.   [...]

[Biologie Moléculaire] Parenthèses dans un couple d'amorces

Bonjour, je recherche dans la bibliographie des amorces pour réaliser des PCR (jusqu'ici tout va bien) et un couple d'intérêts que j'ai trouvés a des parenthèses à l'intérieur de sa séquence.  [...] Mais en fait en relisant complètement l'article, je crois avoir compris que ma première impression est la bonne. Il donne la séquence du gène où ces amorces vont s'hybrider et on retrouve la séquence des amorces mais à chaque parenthèse, il faut choisir une des deux lettres.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sanger : G dans un sens et G/A dans l'autre ?!

[Biologie Moléculaire] Sanger. G dans un sens et G/A dans l'autre.  [...] Je suis interne en médecine (pas un pro de la bio mol, donc), actuellement dans un laboratoire de biologie moléculaire, et je tente le séquençage d'un gène ( WNT10B ) non réalisé en routine. J'ai donc designé des amorces. Mon problème est que dans l'exon 4, en c.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dilution amorces: confirmation

Ma question est triviale mais je veux confirmer mes calculs de concentrations pour des dilutions d'amorces pour etre sure.  [...] La concentration de mes amorces avant le mix doit etre à 6µM, je reprend donc mon working tube à 10µM, je prèlève 60µl de la solution et je complète avec 40µl d'eau.  [...]

[Biologie Moléculaire] Durée de conservation des amorces lyophilisées

[Biologie Moléculaire] Durée de conservation des amorces lyophilisées.  [...] Est-ce quelqu'un pourait de dire la durée idéale de conservation des amorces lyophilisées à + 4°C.  [...]