• Forum - Biologie moléculaire, Plasmide, ADN

[Biologie Moléculaire] prestation plasmide AgroT à partir du T DNA

[Biologie Moléculaire] prestation plasmide AgroT à partir du T DNA.  [...] Je cherche une entreprises de Biotechnologies qui pourrait faire des plasmides de transfert et les placer dans Agro T. pour le transfert d'un gène dont on a le cDNA. Pourriez vous m'aider J'ai regardé chez Eurogentec mais j'ai pas trouvé chez eux... et je peux pas le faire dans mon labo.  [...]

Qui a découvert le cancer?

Donc en fait on a commencé à approcher le truc grâce aux virus. Ensuite il y a eu la montée de la biologie moléculaire moderne dans les années 60/70 avec la découverte des transformation bactérienne, des enzymes de restrictions, du clonage, etc... C'est dans ces années qu'on a réussit à couper une séquence, la coller dans un plasmide, et la cloner.  [...] ... Donc avec tous ces outils on était capable d'investiguer les processus de cancérisation avec plus de précisions. Et à la fin des années 70 mais surtout pendant les années 1980, on a réellement commencé à comprendre les bases moléculaire du cancer grâce nottament à Bob Weinberg et Michael Wigler (et tous leurs collaborateurs, thésards et post-docs) qui sont (selon moi) les 2 géants de la cancérologie moléculaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Préparation de plasmide, chloramphenicol

1. On se creuse la tete depuis un moment et on ne sait plus trop quoi faire pour produire ce plasmide. Si vous avez des suggestions, je prends.  [...] 3. Et puis autre question, j'ai egalement lu que l'origine de replication colE1 pourrait necessiter un cofacteur bacterien tres instable. Cultiver des bacteries avec ce plasmides en presence de chloramphenicol ne devrait donc pas permettre d'augmenter le nombre de copie par cellules, puisque si la synthese de proteine est inhibee, le facteur en question n'est pas renouvele, donc le plasmide n'est pas replique.  [...]

[Biologie Moléculaire] compatibilité OriS et Ori de PMB1 dans un même plasmide?

Je vois qu'on est tous du meme avis. pour avoir fait des clonage pUC vs pBC je n'ai jamais vu de plasmide ayant recupéré les deux ori.  [...] J'ai obtenu des colonies de bactéries qui ont poussé avec ce plasmide. Ensuite j'ai prcoédé à des recombinaisons chez la levure et j'ai électroporé les YACs extraits de la levure dans des E. coli DH10bêta. Et là j'ai des résultats bizarres, je ne sais pas si je n'ai pas perdu l'insert, car j'avais des colonies positives (criblage pcr) et après une maxi prep, j'ai obtenu de bonnes quantités d'ADN mais plus de réponse par PCR.  [...]

[Biochimie] Paires de base/2m d'ADN

Tu demandes s'il y a entre 5 et 10 mégabases dans une molécule d'ADN de 2 mètres (désolé mais c'est ambigu parce que 2m me fait penser à un plasmide qui a à peu près ce nom).  [...] Hé bien vu que c'est la taille du génome humain, ça ne fait pas 10 mégabases (ou plutôt paires de base il faudrait dire mais bon...), mais à peu près 3,3 gigabases.   [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

- bruit de fond dû à l'ADN non digéré ou digéré par une seule enzyme. nombre de colonies / µg d'ADN de plasmide digéré incubé avec la ligase.  [...] Par contre, je suis d'accord avec le fait que mettre l'insert n'est pas absolument nécessaire. Un contrôle plasmide digéré + ligase en ayant fait un gel rapide pour vérifier que la digestion est totale est suffisant pour vérifier l'activité ligase. Dans ce cadre, la déphosphorylation ajoute une inconnue énorme puisqu'avec ce contrôle on ne peut pas faire le différentiel entre un plasmide mal déphosphorylé, un plasmide trop déphosphorylé où les extrémités ont commencé à être dégradées par CIP et qui n'est pas ligable, et une activité ligase faible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Créer un plasmide...?

Sauf erreur de ma part (mais j'en suis presque sur), Craig Venter n'a pas cree un genome complet, il s'est contente de le re-assembler et de le mettre dans une cellule vide puis de le re-activer. Tu veux reellement creer un plasmide c'est a dire sans utiliser d'ADN deja existant A mon avis le plus simple est de faire synthetiser des oligos d'une centaines de pb, de les cloner bout a bout dans un plasmide connu, puis de virer la partie connue et de re-liguer ton super plasmide tout nouveau sur lui meme.  [...] Tu veux reellement creer un plasmide c'est a dire sans utiliser d'ADN deja existant A mon avis le plus simple est de faire synthetiser des oligos d'une centaines de pb, de les cloner bout a bout dans un plasmide connu, puis de virer la partie connue et de re-liguer ton super plasmide tout nouveau sur lui meme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transformation chez la bactérie ?

Si ca n'est pas n'est pas un plasmide, il peut être intégré de facon site-spécifique, si l'ADN en question contient une séquence particulière homologue de certaines régions du chromosome bactérien (attention, ca n'est pas un crossing-over. ce terme est réservé à la recombinaison homologue lors de la méiose chez les eucaryotes uniquement).  [...] Mais pour être sûr d'avoir bien compris, quand il s'intègre par hasard (donc pas de recombinaison homologue) cela signifie que si le chromosome bactérien a une taille de 100 bp (je sais que c'est beaucoup trop petit mais cela n'a pas d'importance ici) et que le fragment d'ADN à incorporer possède une taille de 10 bp, alors la taille finale sera de 110 bp (et non de 100 bp comme cela serait le cas s'il y avait recombinaison homologue).  [...]

Precipitation adn plasmidique

Bonjour, après une extraction d'adn plasmidique avec un kit qiagen, je me retrouve avec de faibles concentrations de plasmide. Je souhaterais donc le concentrer un peu afin de pouvoir par la suite le sequencer.  [...] Autre solution tu rajoute a ta culture sur la nuit un peu de chloramphenicol pendant quelques heures. Ca bloque la multiplication des bacteries mais n'affecte pas pas la replication de l'ADN. donc tu augmente la quantité de plasmide dans tes bacteries.  [...]

[Génétique] pb clonage moléculaire

Traitement de l'ADN linéarisé du plasmide vecteur avec la phosphatase alcaline qui enlève les groupes 5' phosphate terminaux évité la recirculation du vecteur et la formation de dimères de plasmide. Après ce traitement, on puisse donc ajouté l'insert.  [...] Une masse moléculaire peu élevée des plasmides car, ils sont faciles à manipuler, ils sont présents en beaucoup d'exemplaire ce qui facilite leurs isolement, mais surtout amplifier l'expression de tout les gène qui y sont clonés. En plus leur taille augmente la probabilité d'y trouver des sites de restriction unique.  [...]