• Forum - Biologie moléculaire, Migration, Fragments, ADN

[Biologie Moléculaire] Temps de migration de long fragments d'ADN

Par contre, les protocoles d'électro ne sont jamais complètement explicités, et comme c'est la première fois que je vais faire migrer des fragments aussi gros, j'ai besoin d'un peu d'aide.  [...] Pour les grands fragments il faut passer par une électrophorèse en champ pulsé pour les séparer convenablement dans un gel d'agarose. Pour le gel il me semble évident qu'il faut prendre le moins concentré, 0,5-0,6%. Le temps de migration c'est au feeling. Vous faites migrer une ou deux heures, vous regardez sous UV, si ce n'est pas bon, vous refaites migrer etc.  [...]

Acides Nucléiques

Lorsqu'on fait un séquençage d'ADN, avec la méthode de Sanger, on reconstitue le génome ensuite par electrophorèse. Les acides nucléiques ont donc des charges différentes (car on se réfère à la taille de tous les fragments séquences et leurs charges ).  [...] Salut. Au moment de la migration, la charge est identique pour chaque fragment d'ADN car la préparation de ton ADN pour l electrophorese sert justement a masquer la charge réel de tes fragments afin que ces derniers aient tous la même charge fictive et migrent uniquement selon leur poid moléculaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr

Le marqueur de référence est placé dans un autre puit situé à la même hauteur. On applique ensuite un courant électrique à ce gel et les fragments d'ADN (naturellement chargés négativement) migrent dans le gel vers la borne positive. Cette migration se fait différemment selon la taille des fragments.  [...] plus ils sont petits et plus ils migrent vite vers la partie inférieure et positive du gel. C'est donc au cours de la migration que se fait la séparation entre ton ADN de départ (très grosse molécule qui restera en haut du gel) et les amplifiats (fragments plus petits qui seront plus bas dans le gel).  [...]

Comment calculer la taille des fragments sur une carte de restriction?

Pour pouvoir comprendre la suite de mes exercices j'ai besoin d'aide en ce qui concerne la détermination de la taille des fragments qui concernent l'image que je vais mettre en pièce jointe.  [...] il y a quand meme un fragment à la migration qui correspond à la taille du plasmide entier linéarisé (et en biologie moléculaire, les simples digestions donnent des renseignements importants) il faut donc quand même dire qu'il y a un fragment de 4,7.  [...]

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

Le marqueur de poids moléculaire (appelé souvent ladder) porte bien son nom. c'est un mélange de fragments d'ADN de taille connue.  [...] De plus comment savoir si mon fragments d'ADN a été digéré J'aurais plusieurs fragments Où est ce en fonction de la migration.  [...]

TP sur les plasmides

Sur nos souches A,B et X on a extrait les plasmides, l'enzyme Pst1 les a digérée au niveau des gènes qui codent pour l'adhésine puis on a fait une électrophorèse sur gel d'agarose (on a donc une migration des fragments d'ADN).  [...] Après avoir réalisé une courbe étalon (graçe au poids moléculaire de référence), on a déterminer la taille de nos fragments expérimentaux. On compare ces tailles en bp (paire de bases) aux fragments de référence, et on dit que si au moins 3 fragments expérimentaux ressemblent à 3 fragments de référence, alors on a à faire au même plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] migration protéine sds page

J'ai réalisé une électrophorèse sds page mais j'ai laissé migré trop longtemps les protéines, cela a-t il une influence au niveau des bandes lors de la révélation.   [...] Pour compléter, si tu laisses migrer trop longtemps, les protéines les plus petites (celles du marqueur comprises) vont sortir de ton gel. Et tu ne les verras donc pas lors de la révélation vu qu'elles ne seront plus là, mais en train de nager dans ton tampon de migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] PFGE : électrophorèse en champ pulsé : Plugs

[Biologie Moléculaire] PFGE. électrophorèse en champ pulsé. Plugs.  [...] je veux demandé une autre chose,restons dans PFGE, quant la photo sera prise et les bandes sont bien claires comment je peux interpretè les bandes.. (c pour mon memoire au fait),comment je décrit la migration des defferents fragments d'ADN des defferents souches.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR: dépôts qui restent dans les puits lors de la migration

[Biologie Moléculaire] PCR. dépôts qui restent dans les puits lors de la migration.  [...] -une 2nde nested, pour laquelle le PM attendu est sensiblement le même que pour la 1ere PCR et qui me permet simplement d'ajouter 4nt à mon gène pour le clonage (utilisation d'un kit).   [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

Il est très possible de cloner un fragment d'ADN génomique amplifié par PCR dans un plasmide extrait mais non amplifié, mais il est préférable de déterminer la concentration approximative disponible de ces 2 olécules avant de les utiliser.  [...] Personnellement je n'ai jamais eut de probleme, mais je passe par une etape de purification sur colone ce qui me permet probablement de m'en debarasser (de la meme maniere que les fragments d'ADN clonés apres migration sur un gel d'agarose+BET. Ceci dit, il en faut vraiment pas bcp, car meme a tres faible concentration ca inhibe tres fort la digestion.  [...]