• Forum - Biologie moléculaire, Expression, Stable

[biologie moléculaire] Probleme expression apres transfection stable

J'ai réalisé une construction en vue de l'expression d'une protéine en stable par des cellules HeLa. Le vecteur utilisé est le pIREShyg3, qui comme son nom l'indique contient.  [...] La construction a bien marché, le séquençage est OK, les cellules transfectées résistent à l'hygromycine (pas les cellules non transfectées contrôle), mais pas de trace de notre protéine, rien. alors que l'expression est importante avec un vecteur pCMV en transitoire.  [...]

[Biologie Cellulaire] Comment chaque molecule sait ou se placer ?

Il y a forcément un côté paradoxal dans ton propos, qui reprend le coeur du dogme central de la biologie moléculaire affirmant L'ADN est le support stable et transmissible de l'information génétique.  [...] Bref la réponse classique est d'utiliser des arguments appartenant à la théorie fondamentale de la biologie moléculaire. Je précise que je ne nie pas les faits expérimentaux accréditant cette théorie qui fait l'unanimité jusqu'à présent. tout ce que tu dis donc Emilie est juste (gradients protéiques antéro-postérieurs, activation des gènes homéobox, etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] transfection transitoire/stable

l'expression transitoire est due au fait que le plasmide exprime la proteine mais comme ce plasmide ne se replique pas il est perdu au cours des divisions cellulaires.  [...] Enfaite Je commence une manip pour faire un pool de transfectant stable en selectionnant avec de la géneticine et maintenant depuis 7 jours avec la geneticine j'ai enfin perdus tout les non transfectants et je me demandais combien de temps me faudras t-il pour éliminer les transfectant transitoire et me retrouver uniquement avec les transfectant stable sachant que je ne clone pas je veux juste un pool de transfectant stable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Conseils pour un kit de transfection stable

[Biologie Moléculaire] Conseils pour un kit de transfection stable.  [...] J'ai envie de me lancer dans la transfection stable mais je suis un peu perdu dans tout les kits qui existent sur le marché. Je voudrais savoir si certains d'entre vous auraient des petits conseils a me donner. J'aurais besoin de transfecter stablement des HEK293 avec un cDNA d'environ 3kb.  [...]

[Biologie Moléculaire] Méthodes d'étude de l'ADN

Finalement, ces cellules doivent exprimé la protéine SC35 et la protéine SC35GFP (fluorescente, au cas où ). La GFP faisant 27kDa, la protéine SC35GFP doit donc faire environ 27+35=62kDa. Et l'on observe réellement une bande supplémentaire forte (car expression intense) et du même niveau environ que la protéine native, que l'on observe également à 35kDa.  [...] Le but de cette était de vérifier la production de SC35GFP, et surtout vérifier son poids moléculaire ainsi que la quantité relative vis-à-vis de la protéine SC35 native. On a donc put en conclure que la protéine SC35 n'est pas trop sur-exprimé (2-3 fois plus dans les cellules SC35GFP+) et que cette sur-expression est stable dans le temps.  [...]

[Biologie Cellulaire] Expression stable: perte du transgène

j'essaie de produire des lignées stables en les transfectant (via liposomes) avec un vecteur plasmidique portant un gène de résistance (sélection au G418) et gène rapporteur (beta galactosidase). Les lignées (293 et CHO) présentent une bonne expression transitoire à 48h, mais quand je passe à la sélection au G418, les 293 meurent en une semaine et pour ce qui est des CHO j'obtiens des clones résistants au G418 (à partir de trois semaines et plus) mais qui n'expriment pas beta gal.  [...] Je pratique la recombinaison homologue avec d'autres types d'organismes (viraux, bactériens...) et je connais la nécessité d'avoir des séquences homologues pour ce faire... Mais pour la création de lignées stables, lorsque l'on regarde bien les vecteurs commerciaux proposés pour ce type d'expérimentation (type pcDNA3.  [...]

[Génétique] Génome humain: 22000, 24000, 25000 gènes ?

Messenger RNA molecules can be copied by reverse transcriptase to create more stable DNA copies called cDNA. When linked to a functional vector, the cDNA is called a clone. OriGene is dedicated to the task of collecting a cDNA clone for every gene variant in the human transcriptome, linked to a consistent mammalian expression vector for use in a systems biology tool.  [...] A complete understanding of the biological significance of these millions of SNP-variants will take decades of research. In the meantime, it is a truth that all molecular biologists must accept and embrace. Considering the prevalence of human SNPs at 0.1% within 33,000 transcripts having average lengths of 2.  [...]

[Biochimie] pourquoi l'oxydation des glucide ne touche que les fonction aux extrémités

Désole c'est parceque je suis interéssé par les acides aminés, pour les oses, comme le glycose, ici On parle de point Moléculaire CH2OH a Un Point Moléculaire trés grande donc elle est prioritaire, est la molécule doit étre Plus stable, ( question de chimie Organique ).  [...] ici On parle de point Moléculaire CH2OH a Un Point Moléculaire trés grande donc elle est prioritaire, est la molécule doit étre Plus stable, ( question de chimie Organique ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Résultats PCR quantitative

Je cherche à montrer la modification de l'expression de gènes dans une lignée cellulaire au cours du temps et des différents stimulus (traitements). Mon échantillon contrôle étant la lignée sans traitement au T 24h post-ensemencement.  [...] Comment l'interprète t-on Est-ce que c'est comme le 2^ Ct, ou si le chiffre obtenu est. 2 on a une a une sur expression, s'il est compris entre 0.4 et 2, l'expression est considérée comme stable et. 0.4 sous-exprimé.  [...]

[Biotechnologie] RNA interference : siRNA, shRNA

Il existe aussi des modèles d'animaux transgéniques shRNA. La séquence permettant l'expression du sh peut être en effet intégrée dans le génome, ce qui permet un silencing sans devoir faire de KO (donc transgénèse, plus simple a mettre en place que la recombinaison homologue). A ma connaissance ce n'est pas très courant.  [...] Pour un shRNA, on utilise un lentivirus qui permet une intégration stable de la construction dans le génome et donc une expression stable du shRNA. S'il n'y a pas d'intégration, il n'y a pas d'expression.  [...]