• Forum - Biologie moléculaire, ADN, Bande

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse.  [...] Sur le principe je ne pense pas avoir compris de travers, c'est surtout sur la determination de la quantité d'ADN dans chaque bande du marqueur qu'il y a quelque chose qui m'échappe. J'essaie de faire logiquement mais à chaque méthode personnelle je trouve un truc différent au bout.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème : bande perdue avec QIAQUICK Gel Extraction Kit !

[Biologie Moléculaire] Problème. bande perdue avec QIAQUICK Gel Extraction Kit.  [...] Le problème est qu'après cette purification, en suivant le protocole A LA LETTRE, je n'obiens que très très peu d'ADN (alors que sur le gel, j'avais de très jolies bandes bien voyantes), de l'ordre de 20ng/uL à peine, et une analyse spectro me donne un grand pic à 225nm environ.  [...]

[Biologie Moléculaire] élèctrophorèse (ADN)

Donc, si tu n'observes pas de bande dans un puits c'est que le poids moléculaire de l'ADN fragmenté n'est pas dans la fourchette de taille observable par le gel d'agarose calibré (autrement dit, ton ADN est tellement petit qu'il a pu passer a travers ce maille et que lors de la migration, il a carrément quitter le gel en migrant vers une électrode).  [...] Les fragments d'ADN ne restent pas sur le gel d'agarose d'où le fait que tu n'as pas plusieurs barre (sinon ça voudrait dire que les délétions dù aux UV donne des molécules d'ADN de tailles différentes) mais bien qu'une seul qui correspond à ton ADN qui est resté intacte (n'oublie pas que tu n'as pas qu'une seule molécule d'ADN dans un puit mais plusieurs).  [...]

[Biologie Moléculaire] technique d'hybridation moléculaire

j'ai réalisé une hybridation moléculaire avec des sonde 16S et des sonde spécifiques d'un gène avec les fragments d'ADN d'une souche bactérienne.Le profil d'hybridation avec la sonde spécifique du gène m'a donné une seule bande de taille 2 megabases. Mon prof ma dit qu'elle correspond à un mini-chromosome.  [...] Eliason et Nordstrom, Replication of minichromosomes in a host in which chromosome replication is random, Molecular microbiology. 1997.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagenèse par PCR : Tm des oligos

Même une PCR tu ne prends jamais le Tm. Classiquement tu prends Ta=Tm-5°C (quoique ça dépend des Taq) mais ton Ta ne doit pas être supérieur à 65°C donc si ton Tm est très élevé tu prends 65°C au maximum. Et si tu as des problèmes il est toujours conseillé de baisser la température, c'est moins spécifique mais tu as plus de chance d'avoir une bande.  [...] Encore une question puisque vous parliez de bandes. on a fait une migration sur gel pour voir si ça a marché et on avait pas de bandes (sauf celle des oligos) mais par contre les marqueurs de taille ont très bien migré. Ca ne veut pas forcement dire que notre PCR n'a pas marché non Sinon pourquoi elle aurait pas marché Erreurs de manipulation plasmide incorrect.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème bande inconnue PCR

Je dirai même plusieurs formes minoritaires, car pour moi tu as plusieurs bandes (je dirais 3 vue la photo), d'intensité d'autant plus faible que le poids moléculaire est élevé.  [...] Concernant ces bandes de poids moléculaire élevé correspondant pas à l'amplicon, je pensais à une hybridation aspécifique, car les amorces 518r et 338f sont spécifique d'une séquenc de l'ARNr 16s qui est présentent chez toutes les bactéries, mais peut-être qu'une autre séquence présente des analogie avec cette séquence, et cela expliquerais la faible intensité (car séquence moins spécifique de celle ciblé).  [...]

A quoi sert une électrophorèse ?

Alors l'électrophorèse c'est super simple, en gros, tu déposes des molécules ou des protéines sur ton gel (dans ton cas c'est de l'ADN), elles vont migrer en fonction de leur poids moléculaires, en bref, elles vont migrer en fonction de leur taille. plus l'ADN est gros, moins il migrera, plus l'ADN est fin, plus il migrera sur le gel.  [...] Les marqueurs servent à évaluer le poids de ton fragment d'ADN qui migre. si tu as un marqueur à 100 pb et que ton ADN a migré au même niveau que les marqueurs (bande des marqueurs et de ton ADN sont côte à côte), ça veut dire que ton fragment d'ADN fait aussi 100 pb (car les molécules migrent en fonction de leur taille).  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

Parce que effectivement la bande du haut s'avèrerait être de l'ADN. D'autant que les ADN c'est très gros et ça ne migrent pas bien loin. Après tu veux en faire quoi de ton ADN Une PCR de vérification serait peut-être pas mal.  [...] Mon conseil, fait un gel 0,8 % agarose, grands puits, mets 10 uL d'ADN et laisse bien migrer. Révèlé au BET et si il y a bande aux UV, cela veut dire qu'il y a ADN (ou ARN même si bon...j'ai déjà expliqué.). Si tu ne vois rien, il n'y a pas d'ADN, si il y a un smear, il y a des ADN mais tout dégradés.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Aucune bande qui pourrait montrer une certaine amplificationd'un fragment d'ADN. par contre tout en bas du gel et au niveau de tous les tubes y a une bande de la même taille et même intensité (paraît comme s'il s'agissait de fragments d'ADN dégénérés...) et qui correspond à la plus petite bande du marqueur et qui est située aussi tt en bas.  [...] Si ta PCR fonctionne bien et est bien optimisée, ta concentration d'amorces est suffisantes pour l'amplification, donc une fois que ta PCR est faire, elles seront devenues les amplicons, donc tu as plus beaucoup d'amplicons. Sachant que ce sont quand même de petits fragments, il y a peu de molècules de BET qui peuvent se fixer dessus.  [...]

[Biochimie] La Replication de l'ADN durant l'Interphase

On remarque que la bande d'un cycle cellulaire se divise en deux pour former un temps en deux cycles. Donc ce serait l'hypothèse semi-conservatif avec les deux brins de l'ADN qui se séparents et servent de modèles pour former de nouveaux brins complémentaires.  [...] Non, personnellement ce que je comprends (relis ton premier message) c'est que les molécules filles seraient alors un mélange plus ou moins aléatoire de parties provenant de la molécule mère et de parties néoformées. Dans ces conditions puisqu'on ne travaille pas sur une cellule mais sur des millions on devrait rencontrer à peu près toutes les valeurs intermédiaires possibles de masses moléculaires.  [...]