• Forum - Biologie, Marquage, Cellules

[Biologie Moléculaire] marquage des cellules par Idu et BR dU

Bonjour, je suis en premiere annee de master biologie sante et je voudrais avoir des renseignements concernants le marquage immunologique des cellules par le I dU et le Br dU... merci pour vos renseignements... bonne soiree.  [...] j'aurais souhaiter avoir des renseignements sur la technique qui consiste a marquer les cellules avec Idu et BrDU... quels sont les etapes de ce marquage, de quel façon il s'effectue, sur quel type de cellule specifiquement,quel est le but d'utiliser IDU et BR dU.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage Fluo Cellules Vivantes

[Biologie Cellulaire] Marquage Fluo Cellules Vivantes.  [...] Connaissez vous des marqueurs fluorescents pour le suivi en microscopie de cellules vivantes Membrane, noyaux, cytosquelette,... (en dehors de la calcéine et de l'hoescht).  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage immuno fluorescent

Bonjour tout le monde, mon problème est le suivant. je souhaiterais cultiver mes cellules sur lames de verre en plaque 24 puits mais je n'arrive pas a trouver des lames de verres rondes de diamètre inférieur à 1.5 cm. En j'ai cherché pourtant. Si vous cultivé sur lames de verre pour faire vos marquages en immunofluorescence pourriez vous m'indiquer le fournisseur des lames de culture Merci par avance.  [...] Attention. toutes les cellules n'adhèrent pas sur du verre et il faut souvent faire un coating.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage par Ac-FITC : du solide ?

je ne pense pas que tu aies le choix. Quelle est la localisation cellulaire de ta protéine En immuno généralement on fixe les cellules puis on les perméabilise pour donner accès aux anticorps. Autre chose. ce type d'approche n'est que peu quantitatif.  [...] Nous travaillons actuellement par point counting. Les cellules sont fixées sur lames puis révélées. Le comptage de la protéine révélée dépend d'un opérateur à l'autre, et j'ai bien peur que la qualité de l'image enregistrée par le microscope ne soit pas de qualité optimale.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage à l'iodure de propidium pour suivi du cycle cellulaire

- J'ai déjà fait un test avec la drogue qui m'intéresse, sachant qu'à la dose max que j'utilise, à t=24h, en TMRM j'ai 100% d'apoptose, mais en PI j'ai 30% uniquement. Je me doute bien qu'on doit observer moins de cellules apoptotiques dans le cas du marquage au PI (même si je ne sais pas trop pourquoi), mais de là à avoir une si grande différence, je pense que mon protocole n'est pas au point.  [...] Pour le marquage IP, comme tu l'as dit, les cellules en subG1 le sont surtout à cause d'une fuite des fragments d'ADN clivés hors de la cellule. Seulement, le clivage régulier de l'ADN internucléosomal est typique d'un processus apoptotique. Dans le cas des autres morts cellulaires, la dégradation de l'ADN peut intervenir plus tardivement dans le cas d'une mort cellulaire par autophagie et/ou est plus anarchique comme dans le cas d'une nécrose.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage de l'activité peroxydase

Mon problème, c'est de pouvoir discriminer deux sous populations de cellules dont on ne connait pas de marqueurs spécifiques.  [...] Pour info, j'en connais qui font du bleu trypan en FACS et c'est fiable. Certainement ce colorant fluoresce pour que ce soit réalisable, mais c'est un bon exemple d'adaptation d'une technique au FACS, comme le suggère Flyingbike pour le marquage peroxydase.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marqueur spéficique apoptose

Le marquage Annexin V en FACS cible l'apotpose. Le problème est qu'après l'apoptose il y a ce qu'on appelle la nécrose post-apoptotique, mais qui se différencie tout de même de la nécrose simple qui elle n'est pas marquée par l'annexin V. On fait toujours un double marquage Annexin V / PI (iodure de propidium), ainsi on peut discriminer 3 types de cellules.  [...] Ben justement, c'est pour ça qu'on fait un double marquage. L'annexine-5 va marquer plus ou moins toutes les cellules mortes, et le deuxième marquage à l'iodure de propidium ne va marquer que les cellules en nécrose. Vu que l'IP est un intercalaire, il ne pourra marquer que les nécrosées, puisque l'ADN des cellules apoptotiques est dégradé.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cycle cellulaire

Il y'a une chose que je ne comprends pas.. l'iodure de propidium je crois ne passe pas la membrane plasmique..c'est pourquoi on utilise le double marquage iodure de propidium + annexine V-flurochrome pour détecter l'apoptose en cytométrie de flux. LEs cellules iodure de propidium négative et annexine V positive sont en apoptose, celle en nécrose sont iodure de propidium + et annexine V -, la membrane plasmique étant lésée l'iodure pénetre dans la cellules et intercale l'adn.  [...] Pour le marquage à l'iodure de propidium, dans le cas d'une étude du cycle cellulaire, on fait une fixation dans l'éthanol à 70% ce qui fait office de perméabilisation pour la pénétration de l'iodure de propidium dans la cellule. Dans le cas d'une étude de l'apoptose avec co-marquage à l'annexin V, on ne fai pas cette fixation à l'éthanol, on met directement les cellules en présence d'iodure de propidium, de RNase A (pour augmenter la proportion d'iodure de propidium se fixant à l'ADN) et l'Annexin V.  [...]

[Biologie Cellulaire] auraient on identifier toute les organites cellulaires de tous les êtres vivants?

parce que avec les méthodes classiques de détection de ces organites on a toujours la question de est ce que la méthode de marquage n'a pas endommagé quelques chose dans la cellule à analyser cette question qui ce pose toujours depuis l'aube de la biologie.  [...] ni confusion d'unité ni confusion organite molécule, il s'avère que les dernières découvertes de la biologie sont des organites de bel et bien quelques nano mètres...quelqu'un de peu futé peut en déduire ce raisonnement...de toute façon la clé de la compréhension du fonctionnement du neurone surtout humain, est bien la compréhension de toute forme d'organite, si on peut isoler ces organites minuscules et les étudier dans leur plus petit détail moléculaire et biochimique nous allons en savoir des trucs sur le fonctionnement du neurone, d'ailleurs je me demande pourquoi en ne m'enseigne pas les nanotechnologies à la fac.  [...]

[Biologie Cellulaire] problème de marquage cytochimique

je réalise des hybridation in situ avec des sondes ARNm (U-DIG) sur coupe de morceau d'éponges. je révèle le marquage avec des anticorps anti-DIG couplé a une phosphatase alcaline. la coloration se fait avec du NBT/BCIP.  [...] le témoin actine doit marquer partout et de la même manière or voila le marquage suis un gradient de coloration allant du pôle basal de la coupe au pôle apical.  [...]