• Forum - Bandes, Quantité, ARN

extraction ARN

Je travaille sur les plantes aussi, et je peux te dire que ton profil est correct. Il est normal de voir des bandes en dessous, j'en vois toujours. D'autant plus, que chez les plantes, tu as aussi l'ARN chloroplastique en plus des ARNt, etc.  [...] Donc tu peux tout à fait continuer avec. Ces bandes apparaissent souvent quand tu déposes une grande quantité d'ARN, mais en théorie ils sont toujours là.  [...]

[Biochimie] Extraction ARN

Je suis actuellement en train d'extraire des ARN viraux par méthode double extraction trizol-trizol LS et lorsque j'ai effectué la migration sur gel, je n'observe que très rarement les deux bandes caractéristiques à 18s et 28s. Normalement, je devrais observer deux belles bandes pour chaque échantillons puisqu'après quantification, j'ai pu voir que mes ARN étaient en concentration satisfaisante ( entre 0.5 et 1.8 µg/µL).  [...] Voilà, ensuite je réalise une quantification et je fais migrer mes ARN sur un gel d'agorose à 1-1.2% à 50V pendant 30min (pas plus sinon mes bandes disparaissent).  [...]

Arn

Moi,je pense que les bandes seront très larges car les arn du noyau sont plus nombreux que les arn cytoplasmiques,la vitesse de migration sera plus faible.car la longueur des fragments des arn cytoplasmique est plus grande que ceux du noyau étant donné que les fragments s' allongent dans le cytoplasme.  [...] Déjà on te demande le profil électrophorétiques qu'il y aura pour les ARN nucléaires. D'après ta question, il n'est nullement question des ARN cytoplasmiques, alors pourquoi est-ce que tu batit tout ton raisonnement sur la comparaison entre ARN nucléaire et cytoplasmique.  [...]

électrophorèse

bonjour,j'ai un petit probleme avec un exercice (en piece jointe )sur l'electrophorese.les bandes a,b,c et d sont marquées d'une fleche sur les pistes 1 a 4 sont nettement plus larges que les autres.  [...] Pour ma part je pense que les bandes sont plus larges car elle correspondent aux ARNr qui sont en effet présents à hauteur de 80% dans le cytoplasme, mais qui sont aussi associés à des protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb dosage ARNtotal spectro

..). Théoriquement, je devrais encore doser après cette étape de DNase puisqu'il faut que je parte de la même quantité de matière pour faire mes RT. Le problème est que j'ai visiblement très peu d'ARN et donc après le traitement DNase l'ARN aura été dilué.  [...] Et au niveau du kit utilisé, ne pensez vous pas que le fait qu'il soit fait pour cellules et tissus de mammifères peut faire diminuer la quantité d'ARNtotal que j'obtiens à la fin.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction faible qté ARN

En déposant 1 µg d'ARN en gel 1,2 % TAE (autoclavé bien que certaines RNases soient resistantes mais je n'ai pas de DEPC) sur une cuve décontaminée à la soude puis au SDS puis à de l'eau autoclavée. j'obtient des bandes 28S et 18S correctes et parfois un smear de dégradation pour les prélèvements vieillis exprès.  [...] Selon moi, c'est complètement normal de voir un smear de fond, quoique quand même beaucoup plus faible que les 28S/18S (d'ARNr et non d'ARNt d'ailleurs). Tu observes ainsi tous les ARNm de la cellule à des tailles différentes. Ce qui n'est pas normal, c'est d'observer une apparence de smear qui débute à la bande des ARNr... donc une dégradation de ceux-ci.  [...]

[Biologie Moléculaire] gel ADN stress

ces ADN sont extraient de feuilles auxquelles j'ai appliqué un stress à différents niveaux. j'ai obtenu des bandes au même niveau. c à d de même taille. mais la quantité diffère.  [...] NB (et à garder en tête). quand on fait une PCR classique, l'intensité des bandes reflètent en général la quantité d'ADN amplifié mais ce n'est pas strictement vrai et il ne faut pas conclure qu'on a plus ou moins d'ADN.  [...]

pb dépots echantillons d'ARN

histoire vecue. j'allais trop au fond du puit. Il ne sortait rien de la pipette. Quand en desespoir de cause j'abandonnais je resortais ma pipette et là, sur pression, d'un coup tout etait evacué et resortait du puit. Game Over. J'ai cru quelques minutes que c'etait ma pipette qui posait problème avant de réaliser que c'etait moi.  [...] En general cela se produit quand on s'est trompé de tampon d'electrophorese, typiquement quand on utilise une solution 10X au lieu d'1X. Sinon il peut rester des traces d'alcool dans l'echantillon ce qui fait remonter l'echantillon a la surface... un grand classique aussi.   [...]

Moustiques résistants

d'après le doc 1, la résistance des moustiques aux insecticides est due à une mutation et/ou à la présence d'une grande quantité d'enzyme nomée estarase, ou encore à la modification de l'acétylcholinestase.  [...] Comme pour le WB, tu peux parfois comparer les bandes pour en déduire des quantités, ou dans tous les cas, la présence/absence du gène choisi.  [...]

[Biologie Moléculaire] RT-PCR à partir d'ARNtot possible ?

2) Des test préliminaires de purification d'ARNm (utilisation des billes magnétiques invitrogen) me donnent un profil moyen sur gel d'acrylamyde 1% (présence de bandes et non de smear.). De plus, l'ARNm semble très variable (et difficile à quantifier). Avez vous un protocole de purification d'ARNm à conseiller (je démarre l'extraction ARNtot au trizol reagent).  [...] Dans mon labo (où je ne suis qu'une stagiaire M2) on extrait les ARN sur colonne avec les kit quiagen. kit mini pour moins de 10 millions de cellules et kit micro en dessous de 500 000 cellules. Ca marche bien. je fais des PCR quantitatives à partir de l'ARN de 160 cellules de souris.  [...]