• Forum - Bandes, Blocage, Membrane

[Biologie Moléculaire] Aide Western Blot avec "taches" claires (marbrures de non marquage)

Le problème est surtout visible avec des blocages BSA et incub d'anticorps contre des prots phosphorylées, qui donnent des westerns avec plus de bruits de fond, d'où taches visibles.  [...] Je suis régulièrement obligé de déshybrider la membrane et refaire blocage/incub etc pour avoir les taches en dehors de mes bandes -pas au même endroit sur la même membrane- (ou pas du tout parfois). Donc le pb est pendant blocage/incub. Mais je ne trouve pas quoi malgré mes différents essais.  [...]

[Microbiologie] western blotting

Pour avoir une idée de la quantité de protéines sur la membrane vous pourriez la passer au bleu colloidal (ou bleu de coomassie). Vous pouvez essayer aussi l'amidoblack si vous ne souhaitez plus utiliser la membrane ensuite.  [...] Le rouge ponceau est aussi pratique pour vérifier qu'il y a bien des protéines sur la membrane, les étapes de blocages peuvent parfois etre problématiques. J'ai parfois observé qu'un blocage plus court améliorait les signaux.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins - Page 2

Mon 2e problem. Jai strippé mes membranes après la 1ere revelation. Apres blocage de la membrane, jai incubé les ACs 1aire, 2aire etc. Mais à la revelation, plus rien. LES Memes ACs qui avaient marché à la premiere revelation ne donnent plus rien. J'ai un film vierge.  [...] Pour pAkt, il faut essayer différentes conditions de blocage, notamment BSA et lait, et aussi changer le milieu d'incubation de l'anticorps (lait ou BSA également).  [...]

[Biologie Cellulaire] Qui à déjà utilisé le système SNAP i.d. de Millipore pour ses Western Blot?

Une representante de millipore m'a présenté le système SNAP i.d. qui me permettrait de faire le blocage de la membrane, l'incubation avec l'anticorps primaire, les lavages et l'incubation avec l'anticorps secondaires de mes WB en une demi heure... Ce qui est très interessant etant donné que ça me ferait gagner une journée à chaque WB.  [...] Je viens de voir le problème du blocage à 0,5% en lait, c'est normal,j'ai eu le même problème,c'est trop ça bloque la cassette et donc l'aspiration ne peut pas se faire.La représentatante Millipore m'a expliqué qu'il fallait se mettre au max à 0,25% (et on peut décendre jusqu'à 0,05%).  [...]

Disgueusie

Existe-il des palliatifs efficaces hormis les bains de bouche - qui n'ont pas d'effets notables - ou les pastilles à sucer - car mon boulot exige une grande disponibilité tant téléphonique que physique.   [...] Au niveau des anxiolytiques/hypnotiques (Alprazolam, diazépam, oxazépam, flurazépam, zopiclone…), on peut retrouver une agueusie, hypogueusie ou dysgueusie dans 0.1 à 6% des cas par blocage de certains récepteurs membranaires, inhibition de la gustine, inhibition de la transmission neuronale des récepteurs.  [...]

[Biologie Cellulaire] prolifération et différenciation cellulaire

En effet mais ce n'est pas toujours le cas. Je pense nottement aux syndrômes myéloprolifératifs qui sont associés à une prolifération excesives d'un ou de plusieurs types de cellules de la lignée myéloïde, sans blocage de la différenciation.  [...] Oui cela peut-être un moyen de procéder. Les cellules sont bloquées à des stades plus ou moins avancés de la différenciation et la détermination du type cellulaire final peut se faire par détermination des marqueurs membranaires en fonction du stade de blocage, etc.  [...]

[Biologie Cellulaire] Synchronisation G1/S par double blocage thymidine

Si oui j'aimerai recueillir vos impressions parce que pour le moment les miennes sont mitigées. Enormément d'apoptose, et quasi abscence de synchronisation.   [...] P.S. 25µM thymidine. 24µM déoxycitidine dans DMEM après transfection lipofectamine et avant le deuxième blocage.  [...]

[Microbiologie] transformation

Je vérifie mes preps en faisant migrer sur gel directement...si c'est fait proprement, je ne vois pas en quoi c'est dérangeant. Bien sûr la bande est ondulée, smear sur les bords...mais ça confirme bien l'extraction du plasmide (la double confirmation serait la digestion, la triple, une pcr.  [...] ..encore faut-il avoir les primers). Quant au blocage dans le puit, c'est effectivement un soucis d'ADNg le plus souvent...mais que tu ne devrais pas rencontrer en miniprep. Peut-être es-tu un peu brutal au cours du protocol et du coup l'ADNg se détache des membranes...ce qui fait que tu le retrouves plus tard.  [...]

au secours ... cycline, Rb et e2F cycle cellulaire...

Ce que je ne comprends pas c'est que si Rb ne se fixe pas a e2F... e2F peut se fixer a l'adn et donc faire son role de facteur de transcription pour les genes qui codent pour des éléments pour la pahse S...et il me semble que la ca me dit le contraire dans le cours, que si la proteine chapeau Rb ne se fixe pas il y a blocage.  [...] p53 peut également induire la transcription de PUMA et NOXA médiateurs de l'apoptose... de même p53 aurait un rôle direct (c'est très controversé) en interagissant avec BAX au niveau de la membrane des mitochondrie (relarguage du cytochrome C ==. apoptose).  [...]

biokinergie - Page 3

La BIOKINERGIE repose sur la mise en évidence d'une organisation spécifique des tissus dans la pathologie. Il s'agit d'enroulements spiralés que l'on retrouve aussi bien à l'origine des blocages osseux et viscéraux, des torsions fasciales ou des contractures musculaires, que sur les points d'acupuncture et les points réflexes à traiter.  [...] En effet, chaque pathologie recouvre des étiologies distinctes. Par exemple. les douleurs rhumatismales de type mécanique sont plutôt en relation avec des blocages ostéo-articulaires alors que les processus inflammatoires sont traités plus efficacement par le biais des points d'acupuncture.  [...]