• Forum - Bandes, ADN, Plaque, UV

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

parce que un plasmide tout seul non digéré ne devrait pas migrer en donnat plusieurs bandes. c'est que si il y a plusieurs type de plasmides qui cohabitent dans une même cellule.  [...] Je repète que pour des raisons expliquées au dessus, il est normal qu'un plasmide non digéré migre en donnant plusieurs bande, même si les différentes bandes correspondent à la même molécule.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Le 1er gel est tout à fait normal, tes ladders sont propres, pour les bandes incurvées c'est pas super flagrant et surement lié à la quantité d'ADN.  [...] Il m'est arrivé d'avoir des bandes moches comme ça lorsque je m'étais planté de bleu de dépôt, j'avais utilisé du bleu de dépot de protéines (avec bétamercapto) pour migrer de l'ADN.  [...]

Conséquence de la concentration d'un tampon électrophorèse sur l'intensité

Sinon, la séparation des bandes dans l'ADN dépend de la concentration d'agarose. plus l'agarose est dilué, plus les petites molécules d'ADN vont migrer vite. Ca peut peut-être réduire la résistance totale du circuit.  [...] Sinon, abaisser la concentration d'agarose a 0.8 ou 0.6 (attention ca fond tres rapidement...) ou changer ton marqueur, certains donne des bandes a 100pb puis 200, 300 etc, pas besoin de migrer bcp pour voir un resultat.  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions relatives à la PCR

Les séquences Alu sont des fragments d'ADN d'environ 300 pb qui sont mobiles dans le génome humain. On y retrouve un site de restriction Alul (d'où leur nom). Certaines personnes possèdent la séquence Alu. d'autres non. L'expérience en question impliquait que plusieurs personnes effectuaient un rincage de leur bouche (pour aller recueillir de l'ADN) avec de l'eau saline et crachait dans un tube qui était ensuite centrifuger.  [...] Merci Josquin pour la réponse concernant les amorces. Pour le problèm, toutefois, toutes les conditions étaient respectées puisque l'expérience à permit d'obtenir des bandes dont la taille était attendue. Toutefois, j'aimerais savoir pourquoi certaines bandes sont moins intenses après amplification.  [...]

[Biotechnologie] Electrophorèse sur gel de polyacrylamide

Vous placez des bandes d'acétate dans un tampon tri-véronal (200 ml pour trois bandes) pendant 10 à 20 minutes puis vous essorez l'excès de tampon en plaçant les bandes entre deux feuilles d epapier absorbant.  [...] J'ai plus de réserve quand à l'électrophorèse d'ADN en gel d'agarose, quel méthode allez-vous utiliser pour révéler l'ADN (du BET (bromure d'éthidium) si oui, je vous conseille de faire couler aux étudiants des gels sans BET, et d'en préparer préalablement vous même un avec du BET, qui sera celui que vous utiliserez pour l'électrophorèse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème révélation WB

Lors qu'on fait la révélation/fixation sur un premier film, après 1 min d'exposition on obtient bien des bandes correspondant aux 3 la protéines recherchées. Cependant si juste 1 min après on réexpose un nouveau film on obtient plus rien pour l'une des trois protéine, le signal à totalement disparu.  [...] Sans avoir les images sous les yeux, les interprétations que nous pouvons faire de ton problème sont approximatives. Selon les niveaux d'intensité, les comportements des bandes peuvent pas mal différer, je ne peux pas aller plus loin dans les suppositions.  [...]

[Génétique] Analyse plasmides recombinants/non recombinants

Le probleme c'est que pour le puits 6 je ne sais pas quoi déduire... Pourquoi y a t il 2 bandes La bande a 3000 correspondrait à un excès de plasmides non recombinants et la bande a 6000 mon plasmide contenant l'insert Le soucis c'est que quand j'ai lysé les bactéries, je n'en n'ai vu aucune de bleue dans le culot contrairement à l'échantillon A.  [...] pour le puits 3, on a mis 5uL de colorant et 10uL d'ADN non digéré. Pour la PCR on a mis 12,5 uL de master mix, 1uL d'amorce M13F, 1uL d'amorce M13R, on a complété avec de l'eau jusqu'à 24uL puis on a mis 1uL d'ADN plasmidique.  [...]

Mapk P38

Hello est ce que quelqu'un a déjà essayé de différencier par un Western la protéine P38 et cette même prot sous forme phosphorylée En gros est ce que je peux mettre mes deux anticorps primaires en même temps et voir apparaître 2 bandes Je fais des gels d'électrophorèse à 12%, est ce que la résolution est assez forte.  [...] Si ta proteine est multiphosphorylée oui tu peux faire ca, normalement les proteines phosphorylées migrant plus lentement tu observera des bandes superieures. Il faut etre sur que les bandes inferieures ne sont pas des produits de degradation (donc un témoin traité a la phosphatase alcaline est essentiel).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Nous sommes donc repartis des extractions d'ARN, des ADNc et des PCR1 de cet été et nous avons obtenus des smear (une énorme bande très difuse) qui se trouve de 0 à 700pb en PCR1 et de 1000 à 3000pb en PCR2 avec une tendance a être un peu plus fort au niveau de 1700pb (bande attendue).  [...] Nous avons essayer aussi de purifié le gel en PCR1 et PCR2 en prenant que ce qui ce situe entre 1000 et 2500 pb, mais nous avons que des bandes à 100 et 150 pb, ce qui correspond surement aux amorces seules ou hybridées entre elles.  [...]

Problème de migration SDS-PAGE

Je fais migrer mes fractions sur un gel SDS-PAGE 15%, la migration ne migre pas droite par rappport à mon marqueur de taille, j'ai des trop grosse bande (non du à la quantité de protéine déposée) qui déborde c'est assez bizzarre auriez-vous une solution à mon soucis.  [...] Si les ratios étaient de 50% chacun, cela signifierait que votre Laemmli est à 2X. Si vous voulez préparer une solution de volume final de 10µL par exemple, il faudra ajouter 10/5=2µL de bleu de laemmli, et complétez jusque 10µL avec vos échantillons dilués à la bonne concentration.   [...]