• Forum - Bande, Plasmide, Fragment, Chromosome

[Microbiologie] Profil PFGE

j'ai une petite question.Lors des analyse d'un profil PFGE,j'arrive pas à comprendre comment on peut distingué entre une bande qui correspond à un plasmide ou à un fragment d'un chromosome,ou à un mini chromosome,ou à un ARN.. c'est selon la taille de la bande.  [...]

clonage/enzyme en dehors du site multiple de clonage

Bonjour à tous, je vous sollicite pour une petite question. Lors d'un TP, j'ai inséré un fragment d'ADN dans un plasmide et derrière, pour vérifier la ligation, j'ai digéré le plasmide avec les 2 enzymes de restriction utilisé à la base et après migration sur gel il se trouve que au lieu d'avoir 2 fragments attendus (un fragment correspondant à mon plasmide et un fragment correspondant à mon insert) je n'ai qu'une seule bande.  [...] Il se peut que ton MCS ait été enlevé au cours du clonage (c'est normalement peu probable si tu as bien designé ton clonage). Il se peut également que le plasmide de départ soit muté et ne possède pas certains sites de restriction (également assez peu probable).  [...]

[Biologie Moléculaire] technique d'hybridation moléculaire

j'ai réalisé une hybridation moléculaire avec des sonde 16S et des sonde spécifiques d'un gène avec les fragments d'ADN d'une souche bactérienne.Le profil d'hybridation avec la sonde spécifique du gène m'a donné une seule bande de taille 2 megabases. Mon prof ma dit qu'elle correspond à un mini-chromosome.  [...] je suis désolée mais j'ai pas compris la définition exacte d'un mini chromosome...est -il toujours présent dans le génome et pourquoi on considére pas que cette bande correspond à un plasmide par exemple.  [...]

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

Un plasmide n'est pas une cellule. C'est un fragment petit d'ADN circulaire doté d'une capacité autoréplicative. Faire cette erreur c'est un peu comme confondre un chromosome avec une cellule.  [...] apropos de ce sujet,dans un profil d'electrophorese comment on arrive a distinguer entre une bande qui correspond a un plasmide,ou a un chromosome,,  [...]

[Biologie Cellulaire] Enzyme de restriction

Le plasmide X2R contient dans sa séquence 2 sites de restriction BamH2 et 2 sites de restriction Sif1. J'obtiens deux fragments d'ADN après traitement du plasmide par BamH2. Cela signifie que.  [...] Même si on part du fait que la réponse est vrai, le fait qu'il y ai deux fragment n'indique en rien que les deux sites sont proches, a la limite si ils sont diametrallement opposé alors les deux fragments auront la même taille et en gel electrophorese tu ne verras qu'une seule bande bien qu'il y ait deux fragments, et donc si on voit deux bandes on peut dire qu'ils ne sont pas diamètralement opposés sur le plasmide, mais ce ne veut pas dire qu'ils sont cotes a cote pour autant, ils peuvent etre partout sur la plasmide avec pour seule exception d'étre à l'autre bout du diamètre l'un de l'autre,  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

Effectivement j'ai négligé l'ADN génomique. Donc non c'est pas la quantité de plasmide. Cependant je maintiens que ça n'est pas deux bandes mais un dédoublement d'une seule bande du fait de la masse d'ADN que vous avez produit. Ca arrive, c'est rien.  [...] Là dessus il y a effectivement une petite remarque à faire. On voit que l'on a la même intensité de bande pour l'ADN produit à partir de l'ADNg et du plasmide. On peut penser ( ) qu'il y a pas mal de plasmide comme matrice pour les PCR. Du coup c'est vrai que l'on a du mal à imaginer que l'on ait mis autant d'ADNg.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème transfo...

En fait, le plasmide natif est linéarisé, les enzymes sont fonctionnelles. Lorsque je digère les plasmides issus des transformants, j'ai des bandes qui ne ressemblent strictement à rien de ce que j'attends... J'attends une bande entre 4 et 5 kb qui correspond à mon plasmide linéarisé et une bande à environ 1,3 kb qui correspond à l'insert.  [...] Ca n'a rien a voir avec de la SF, il y a meme fort a parier que les origines de replication des plasmides de bacillus soient completement differentes des origines des plasmides de coli. Ca demande a etre verifie, mais si ton plasmide n'a pas une origine coli, ca risque de poser probleme.  [...]

électrophorèse sur gel d'agarose

Ta première enzyme ouvre le plasmide en coupant à un premier endroit. La seconde coupe à un autre site, et produit 2 morceaux de tailles différentes. d'où les 2 bandes.  [...] Pour le BET c'est bien le cas, je suppose que c'est pareil pour les autres intercalants de l'ADN. Par contre cette relation marche t'elle que pour les fragments linéaires Une bande correspondant a un plasmide surenroulé ne devrait-elle pas être moins intense du au fait que certaines bases de l'ADN soit inaccessible du a la topologie de l'ADN ou alors est-ce négligeable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Aucune bande qui pourrait montrer une certaine amplificationd'un fragment d'ADN. par contre tout en bas du gel et au niveau de tous les tubes y a une bande de la même taille et même intensité (paraît comme s'il s'agissait de fragments d'ADN dégénérés...) et qui correspond à la plus petite bande du marqueur et qui est située aussi tt en bas.  [...] Le bleu de bromophénol est juste un colorant qui migre comme l'ADN pour suivre l'avancement de la migration. C'est une petite molécule qui migre a peu près à la même vitesse qu'un petit fragment d'ADN. Les bandes d'ADN que tu vois sont les amorces non utilisées dans la réaction et se retrouvent a peu pres a la hauteur du bleu.  [...]

[Génétique] Dm sur la myopathie de Duchenne

2) les bandes ne sont pas le chromosome X mais un fragment du gène considéré. Les 2 allèles ont des séquences différentes, donc les enzymes de restriction coupent en des endroits différents, donc les fragments obtenus n'ont pas la même taille.  [...] Pour l'analyse. 1 bande signifie que l'on possède un seul allèle (car un seul chromosome X si c'est un homme, ou deux allèles identiques sur chacun des chromosomes X pour une femme). 2 bandes signifie que l'on est une femme hétérozygote (porteuse saine).  [...]