• Forum - Bande, Intensité, Témoin

[Biotechnologie] L'ADN mystère !!!

après une PCR pr amplifier le gène codant pr l'ARN 16S chez P. fluorescens nous avons eu sur l'électrophorèse une bande de très forte intensité pour le témoin NEGATIF (et seulement pour celui-ci) correspondant à la même taille que l'ADN test. Nous avons de suite pensé à une erreur de manipulation.  [...] s'il s'agissait d'une contamination de l'un des réactifs, on aurait cette même bande pr ts les autres puits, ce ki n'est pas le cas, celles des échantillons étant largemt + faibles. Et s'il sagissait d'une contamination entre tubes test et tube témoin, l'intensité aurait été plus faible ou au pire identik à celles des tubes test.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

Les bandes d'actine ont un rôle de témoin. Par exemple, pour pouvoir comparer les deux conditions dans le gel A il faut que les deux bandes d'actine est la même intensité (ce qui veut dire que les quantités de protéines sont a peu près égales entre les deux conditions).  [...] actin. c'est le témoin de charge qui permet d'estimer l'intensité de chaque bande et d'évaluer le niveau d'expression de chaque proteine.  [...]

[1ere S] L'importance de l'électrophorese

je susi en 1ere S et en sce moment nous étudions les enzymes en particulier. nous n'avons pas encore fait le chapitre sur les phénotypes. A un moment, nous avons pris du blanc d'oeuf et nous l'avons mis dans une longue bande trempée dans de l'alcool (o u de l'eau je ne sais plus trop) pour ainsi observer différents dépôts.  [...] Elle permet d'identifier des molécules présentes chez un individu par comparaison avec une bande témoin (par exemple repérage de l'hémoglobine S présente dans les hématies drépanocytaires).  [...]

[Biochimie] Concentration d'un produit PCR

ca depend de l'intensité de la bande, en général tu peu t'aider du marqueur de poids moléculaire. ca te donnera une idée de ta concentration.  [...] On peut avoir une concentration à partir de la bande du produit PCR uhuh dire qu'on m'a toujours répété que la PCR n'était pas quantitative... Je pense que ça doit être loin d'être précis la lecture de l'intensité de la bande... le BET ne se fixe pas de la même façon sur tous les produits.  [...]

problème PCR nichée

avant de tester mes échantillons j'ai voulu vérifier la PCR et sa sensibilité j'ai donc testé un malade dont la concentration plasmatique d'ADN est connue (10 5 ) avec des dilutions successives jusqu'à 10 2. j'ai obtenu une très belle bande pour le tube 10 2 et une très faible pour le 10 4 et rien pour les 10 5 et 10 3.  [...] 2/ j'ai testé comme meme quelques échantillons une fois avec comme témoin positif ce témoin à 10 2 et la PCR avait très bien marchée. j'ai restesté une 2ème fois avec d'autre échantillons et la j'ai aucune bande dans le témoin positif alors que j'ai rien changé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème PCR : Besoin d'aide

C'est dans cette troisième étape que mon problème se situe. J'ai déjà fait une quinzaine de fois l'expérience (qui demande près de 8h de temps) et le problème persiste….   [...] quand j'utilise l'ARN synthétique que l'on ma fourni comme Témoin Positif, j'ai une bande, mais quand j'utilise mes échantillons de terrains, je n'ia pas de bande... mais je ne l'ai encore fait que sur un seul échantillon... je vais réessayer. merci beaucoup en tout cas.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et témoin négatif

En général non, mais tout dépend de la taille de la bande. Ca peut être les amorces, des dimères d'amorces, voire de la matrice, s'il y en avait beaucoup. Une petite photo du gel pourrait aider.  [...] Concernant la quantité relative. En général pour les ladders commerciaux, on peut connaitre la quantité d'ADN pour une ou plusieurs bandes du marqueurs de taille. Apres il faut comparer l'intensité du produit de PCR avec l'intensité des bandes du marqueurs de taille.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification par PCR

Jusque-là tout parait normal. Le problème lors de la visualisation sous UV,je voit la bande de 510 pb, mais aussi une autre bande de 120 pb... C'est une amplification non spécifique sachant qu'elle n'apparait pas dans le témoin négatif (donc c'est pas une contamination).  [...] Oui et non. Trop peut aussi favoriser la fixation des amorces sur des zones non spécifiques, pouvant expliquer cette bande de 100pb. Les amorces sont de toute façon toujours en excès (La réaction perd de son efficacité au fil des cycles, autant que ce ne soit pas pour un truc aussi bête que ça) mais il convient de tester différentes concentrations pour être sur de ne pas avoir ce type de problèmes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation d'un Southern Blot

J'avais d'abord pensé à une mutation ponctuelle sur le site de restriction Eco R1, mais l'homogénéité des bandes infirme cette hypothèse. Si c'était le cas, on devrait avoir une des deux bandes plus épaisses, voire la disparition de la bande de 3kb au profit de la 4kb.  [...] Maintenant il faut se demander ce que signifie que l'on ne voit que la bande de 3kb en 2. La conclusion la plus évidente est qu'elle ne peut pas se fixer sur la bande 1kb. Il y a donc une mutation en aval du site E1. Et vous avez raison, ce n'est probablement pas une mutation ponctuelle. La sonde la bypasserait facilement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme pcr

J'ai un probleme serieux je fait la recherche de la tuberculose par pcr mais ces jours le blanc (control negtif ) montr une bande apres l'electeophorese et cette bande ne se retrouve que dans le blanc mais a la meme taille que les cas de recherche aussi bien et sa taille sa differt de la bande du remoin de kk base de moin et dans la meme pcr j'ai deux cas negatifs.  [...] Mais pour mes derniers pcr je trouve une bande au niveau du control negatif ( sans adn) mais cette bande ne se trouve pas dans tout les cas.  [...]