• Forum - Bande, Fragment, ADN

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Aucune bande qui pourrait montrer une certaine amplificationd'un fragment d'ADN. par contre tout en bas du gel et au niveau de tous les tubes y a une bande de la même taille et même intensité (paraît comme s'il s'agissait de fragments d'ADN dégénérés...) et qui correspond à la plus petite bande du marqueur et qui est située aussi tt en bas.  [...] Le bleu de bromophénol est juste un colorant qui migre comme l'ADN pour suivre l'avancement de la migration. C'est une petite molécule qui migre a peu près à la même vitesse qu'un petit fragment d'ADN. Les bandes d'ADN que tu vois sont les amorces non utilisées dans la réaction et se retrouvent a peu pres a la hauteur du bleu.  [...]

A quoi sert une électrophorèse ?

Les marqueurs servent à évaluer le poids de ton fragment d'ADN qui migre. si tu as un marqueur à 100 pb et que ton ADN a migré au même niveau que les marqueurs (bande des marqueurs et de ton ADN sont côte à côte), ça veut dire que ton fragment d'ADN fait aussi 100 pb (car les molécules migrent en fonction de leur taille).  [...] Aussi, on parle aussi de fragments d'ADN, quand l'ADN migre et qu'il y a plusieurs barres, c'est que ces fragments ont tous migrés indépendamment des uns des autres.  [...]

clonage/enzyme en dehors du site multiple de clonage

Bonjour à tous, je vous sollicite pour une petite question. Lors d'un TP, j'ai inséré un fragment d'ADN dans un plasmide et derrière, pour vérifier la ligation, j'ai digéré le plasmide avec les 2 enzymes de restriction utilisé à la base et après migration sur gel il se trouve que au lieu d'avoir 2 fragments attendus (un fragment correspondant à mon plasmide et un fragment correspondant à mon insert) je n'ai qu'une seule bande.  [...] Il se peut que ton MCS ait été enlevé au cours du clonage (c'est normalement peu probable si tu as bien designé ton clonage). Il se peut également que le plasmide de départ soit muté et ne possède pas certains sites de restriction (également assez peu probable).   [...]

sonde et enzyme de restriction

Bonjour tout le monde, j'ai une petite question en génétique, alors si j'ai une sonde qui va s'hybrider avec un fragement d'adn, et il y a une enzyme de restriction qui va couper au beau milieu du fragment, du coup la partie qui était supposée s'hybrider avec la sonde, devient coupée en deux, est ce que la sonde, va s'hybrider avec une des deux petits bouts crées autrement dit si je fais une éléctrophorese j'aurai une seule bande ou bien 2.  [...] Si on coupe au milieu du fragment on a 2 ADN de même taille donc 1 seul bande après electrophorese et la sonde ne s'hybride à rien. Par contre si après l'electrophorese on fait un Southern, là la sonde intervient, elle s'hybride et allume les 2 fragments de même taille (donc 1 seule bande).  [...]

TPE sur l'ADN aide pour l'électrophorèse :)

L'électrophorèse consiste a faire migrer des fragments d'ADN dans un gel grace à un champs électrique. L'ADN étant chargé négativement les molécules vont se déplacer vers la cathode. Comme le gel, consiste en un maillage, les grandes molécules sont plus retenues que les petites.  [...] à chaque '= bande correspond un fragment d'ADN. En comparant les profils de ta salive et de tes suspects tu peux potentiellement trouvé le coupable. Mais j'avoue de jamais avoir entendu qu'on pouvait utiliser une électrophorèse pour la criminalogie. J'aurai plutot pensé au polymorphisme du génome.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et température d'hybridation

Par contre j'ai des bandes très correctes et justement avant d'augmenter la température de deux degrés j'avais des smears. Et de deux degrés me paraissaient peut mais apparemment non, des que la température dépasse celle théorique pour l'hybridation des amorces, elles semblent alors contraintes à se fixer encore plus spécifiquement.  [...] Ca signifie en fait que tu obtient une trainée d'adn alors qu'avec une PCR tu amplifie normalement un fragment bien précis (et tu devrais donc avoir une bande (ou plusieurs si tu utilise plusieurs amorces) et non pas une trainée d'adn).  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

Le plus bas que j'ai fait c'est 0.4% d'agarose et ça pouvait encore allé, d'où ma remarque sur le 0.2%...C'est vrai que ça fait peu. Déjà si tu fais un 0.6% ce sera mieux en effet. Mais ton but n'est apparemment pas de séparer des fragments d'ADN génomique, c'est plutôt pour voir si ta purif a bien marché, je me trompe Dans ce cas l'important est que ton ADN génomique rentre dans le gel pour vérifier la netteté de la bande, afin de voir s'il n'y a pas de dégradation qui causerait un smear en-dessous.  [...] C'est inutile de diminuer encore la concentration en agarose dans le gel. Les fragments d'ADN génomique sont simplement trop gros pour être résolus dans un gel d'agarose en électrophorèse classique. Mais ce n'est pas ce que vous souhaitez faire, donc pas de souci à avoir.  [...]

[Biochimie] Bande inconnu sur gel d'agarose

C'est simplement de gros paquets d'ADN fragmentés (en beaux morceaux) qui rentrent dans le gel et vous font une bande. Vous avez mis combien de microgrammes dans le gel.  [...] Piwi -. J'en ai mis 2 micro gramme. Mais dans ce cas comment ca se fait que je n'ai pas une multitude de bande au lieu d'une seule Les fragments d'ADN ne font quand même pas tous la même taille.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

Je reviens de TP où on a eu des résultats bizare. On a réalisé une PCR classique sur un fragment d'ADN, et lorsque l'on a migré les produits il y avait deux bandes l'une à la taille attendu (500Pb) l'autre presque deux fois plus petite (300Pb).  [...] Non je parlais des bandes qui sont beaucoup plus faible, en gaut du gel..La bande à 500pb c'est le fragment d'ADN que l'on a amplifié par PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse

Sur le principe je ne pense pas avoir compris de travers, c'est surtout sur la determination de la quantité d'ADN dans chaque bande du marqueur qu'il y a quelque chose qui m'échappe. J'essaie de faire logiquement mais à chaque méthode personnelle je trouve un truc différent au bout.  [...] La question en elle-même est donc. comment faire pour déterminer la quantité d'ADn présente dans chaque bande du marqueur PM.  [...]