• Forum - Bande, ARN, échantillons

[Génétique] Migration dans la mauvaise direction...

Je réalise actuellement des expériences en laboratoire et j'ai quelques problèmes avec la migration de mes échantillons après purification sur le gel d'agarose.  [...] J'ai effectué une PCR sur 6 échantillons (chacun avec des primers différents), j'ai contrôlé son efficacité avec une electrophorèse sur gel d'agarose 2%, les résultats se sont avérés positifs (bande unique et de la bonne taille pour chacun des 6 échantillons).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

La deuxième PCR que vous faites est une nested Est-ce que vous avez essayé de diluer les amplicons de la PCR1 Même diluer ton échantillon initial en cDNA.  [...] Je viens de penser à autre chose aussi. Est-ce que tu as un témoin positif de ta PCR Ca te permettra de cibler où est ton problème dans le mix ou dans les échantillons.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème révélation WB

Oui on est passé à 5 min d'expo pour la deuxième. Et oui evidemment la bande était beaucoup plus faible que les deux autres et irrégulière selon les échantillons ( ce qui nous ennui puisqu'il s'agit du controle alpha-actine... ).  [...] Evidement je ne trouve cela pas surprenant non plus, je cherche juste une explication au fait qu'une bande ait disparu alors que les deux autres sont totalement intactes.  [...]

[Génétique] Analyse plasmides recombinants/non recombinants

Ensuite, avec différents échantillons, on a fait pour A et B, une PCR, une digestion par EcoRI puis on a fait migrer ces deux produits dans un gel dagarose 1% avec l'ADN A et B non digéré. Au final on a 10 puits.  [...] Le probleme c'est que pour le puits 6 je ne sais pas quoi déduire... Pourquoi y a t il 2 bandes La bande a 3000 correspondrait à un excès de plasmides non recombinants et la bande a 6000 mon plasmide contenant l'insert Le soucis c'est que quand j'ai lysé les bactéries, je n'en n'ai vu aucune de bleue dans le culot contrairement à l'échantillon A.  [...]

[Biologie Moléculaire] Causes d'échecs de la production de protéines recombinantes

essayer différentes méthodes chromatographiques (échangeuse d'ions, interactions hydrophobes...) et essayer de voir si l'on récupère cette bande.  [...] Logiquement, la grosse bande n'est pas encore présente sur gel pour cet échantillon. Donc tu peux voir ainsi, en comparant les deux puits, à quelle taille apparaît ta protéine (à supposer que tu ne la connaissait pas, ce qui semblait être ta question, même si c'est bizarre ).  [...]

[Biochimie] Test de grossesse

Quand tu mets ton echantillon tu fais migrer un Ac-anti hcg (qui migre avec l'urine ou le sérum). Tu as donc soit l'ac anti hcg seul ou le complexe ag-ac si l'hormone est présente. Dans une première fenetre tu détectes l'ac antihcg (libre ou lié) il se forme le -.  [...] Je rappelle que les Ac antihcg migrent en même temps que ton échantillon (ils sont présents dans le fond du puits où tu mets l'échantillon).  [...]

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

Mais comme ces choses exceptionnelles ne se produisent, on peut estimer qu'on a affaire à plusieurs plasmides, car on manipule plusieurs cellules, donc on aura affaire à une quantité de topologies différente de 1... D'où le nombre de bandes différent de 1 dans le puits 1 (pBR non digéré).  [...] apropos de ce sujet,dans un profil d'electrophorese comment on arrive a distinguer entre une bande qui correspond a un plasmide,ou a un chromosome,,  [...]

[Génétique] problème d'extraction d'ADN

Sinon a part tester un autre protocole, si le frigo est Ok, que l'echantillon reste bien sur glace aussi souvent que possible et qu'il y a bien des inhibiteurs, et que tu n'as rien changé dans tes habitudes de manipulation... il n'y a pas beaucoup d'autres solutions,  [...] Techniquement non pour du génomique si il n'est pas degradé tu obtiens une seule bande (plus ou moins epaisse par rapport à une bande normale) car les chromosomes font plus ou moins la meme taille (apres ca depend des organismes, je ne parle pas du chromosome Y humain comparé aux autres) et et les quelques differences de taille ne se voient pas à de hautes tailles à moins de faire migrer longtemps.  [...]

Saturation BSA pour purif de protéine His-tagged

Donc je me demande si on ne pourrai pas enlever ce bruit de fond (qui ne doit pas partir totalement car les protéines sont surexprimées mais qui doit quand même fortement diminuer) en saturant la résine avec 1% BSA avant l'incubation avec les échantillons.  [...] Merci Fatcha mais là je ne pense pas que ce soit un problème d'anticorps. L'anticorps que j'utilise est super bon et on a tous cette bande (je travaille avec 2 autres personnes sur la même thématique). Pour les western par contre j'utilise du lait Marvel. C'est vachement bien mais on ne le trouve qu'en Angleterre donc pas super pratique.  [...]

Techniques de compression

Les équipes de secours utilisent un CHU (Coussin Hémostatique d'Urgence) composé d'une éponge très dense imprégnée d'un produit antiseptique et d'une bande élastique non adhésive.  [...] (Coussin Hémostatique d'Urgence) composé d'une éponge très dense imprégnée d'un produit antiseptique et d'une bande élastique non adhésive.  [...]