• Forum - Bande, ARN, échantillons

[Biologie Moléculaire] Problème PCR : Besoin d'aide

quand j'utilise l'ARN synthétique que l'on ma fourni comme Témoin Positif, j'ai une bande, mais quand j'utilise mes échantillons de terrains, je n'ia pas de bande... mais je ne l'ai encore fait que sur un seul échantillon... je vais réessayer. merci beaucoup en tout cas.  [...] Je ne suis pas sûre que la remarque suivante sera très pertinente dans ton cas mais bon... Tu pars d'échantillons totaux si j'ai bien compris. Dans mon cas, je partais de sang total et je me suis rendue compte que les ARN eucaryotes gênaient pour la suite.  [...]

MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

non ce que je ne comprend pas c'est la 3 ème bande obsérvé lors de mes dépots d'ARN extrait dans chacun de mes échantillons pour n'importe quel puit.  [...] effectivement mes échantillons d'ARN sont extraits o trizol (phénol-isothiocyanate de guanidine)-chloroforme, précipités à l'isopropanol et lavé à l'éthanol. protocole classique.  [...]

[Biologie Moléculaire] RT-PCR semi-quantitative

1- dans une reverse transcriptase-PCR, j'ai utilisé pour le même échantillon d'ARN, une amorce anti-sens dans un tube, et les 2 amorces (sens et anti-sens) dans un autre, sachant que mon ARN est transcrit avec l'amorce anti-sens, je dois avoir ma bande dans les 2 cas.  [...] Or, je n'ai eu de résultat qu'avec l'emploi d'une seule amorce, est ce que vous aurez une explication par hasard (sur le gel, je ne vois qu'un nuage de bandes du genre smear, pour l'échantillon avec 2 amorces).  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN contaminé par de l'ADNgénomique

.. j'ai donc lancé une PCR sur mes ARN avec des amorces de l'actine et effectivement une belle bande apparait en electrophorèse.  [...] merci à tous, pour répondre à Yoyo l'actine s'exprime bien dans mes cellules mais sachant que la PCR n'agit que sur les ADN (avec une Taq polymérase classique biensur je ne parle pas de RT) lorsque je lance une PCR avec les amorces de l'actine sur mon ARn je en devrai rien obtenir et pourtant j'ai une bande donc il y à de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

Je rappelle juste que mon souci est que j'ai perdu une bande lors du génotypage de souris mutées. Pour illustrer je joins 2 photos, une avant = ce que je devrais avoir et une après = ce que j'obtiens, ce ne sont pas les mêmes échantillons mais on voit bien qu'une bande a disparu.  [...] Après de nombreux essais sans succès j'ai récupéré la 2ème bande avec 4mM de Mg2+ et 0.5µM d'amorces (avant j'étais à 1.5mM Mg2+ et 0.2µM d'amorces) mais elle est très faible et j'ai aussi amplifié des produits non spécifiques. Donc je suis restée dans ces conditions pour analyser d'autres échantillons mais je n'ai encore obtenu qu'une seule bande, donc retour à la case départ.  [...]

une seul bande d'ARN visible voir deux...

voilà suite a vos réponses j'ai pu continuer ma manip'. Mes échantillons se déposent bien au fond de mon gel mais lorsque je le visualise sous UV, je n'apercoit qu'une bande et non au moins 2 + un smire.  [...] Avec difficultés j'ai pu voir une deusieme bande mais très faible. Cela pourrait il venir de la concentration trop élevé de mon échantillon de départ (avant extraction de l'ARN).  [...]

[Biologie Moléculaire] problème de qPCR sur des échantillons de maïs

je cherche à mettre au point une méthode de quantification en Evagreen d'un champignon dans des échantillons de maïs cultivés en serre, et tout a bien marché (dessin d'amorces spécifiques, quantification d'ADN du champignon pur...) mais dès que j'ai voulu passer les échantillons de maïs, j'ai obtenu des résultats non répétables, avec des pics de fluorescence qui ne correspondent pas au champignon et surtout qui changent d'un jour à l'autre.  [...] .. Il faut savoir que lorsque je passe mes échantillons en PCR, j'obtiens bien une bande correspondant au champignon, mais également une bande de au niveau du marqueur de 75 paires de bases... cette bande est toujours plus forte quand le champignon est présent.  [...]

[Microbiologie] Viabilité d'une bactérie et ARN - Page 2

Pour l'extraction, j'applique le protocole fourni avec le flacon du trizolreagent en partant d'échantillons biologiques frais.  [...] oui exactement, c'est le cas après la congélation à -80° (j'ai deux bandes 18s et 28s pour des échantillons testés immédiatement), c'est pourquoi j'étais convaincue que c'était de l'ADN et j'ai fait l'essai avec la DNase. mais bon, la bande est toujours là, y aurait une explication.  [...]

problème PCR nichée

avant de tester mes échantillons j'ai voulu vérifier la PCR et sa sensibilité j'ai donc testé un malade dont la concentration plasmatique d'ADN est connue (10 5 ) avec des dilutions successives jusqu'à 10 2. j'ai obtenu une très belle bande pour le tube 10 2 et une très faible pour le 10 4 et rien pour les 10 5 et 10 3.  [...] 2/ j'ai testé comme meme quelques échantillons une fois avec comme témoin positif ce témoin à 10 2 et la PCR avait très bien marchée. j'ai restesté une 2ème fois avec d'autre échantillons et la j'ai aucune bande dans le témoin positif alors que j'ai rien changé.  [...]

[Génétique] Migration dans la mauvaise direction...

Je réalise actuellement des expériences en laboratoire et j'ai quelques problèmes avec la migration de mes échantillons après purification sur le gel d'agarose.  [...] J'ai effectué une PCR sur 6 échantillons (chacun avec des primers différents), j'ai contrôlé son efficacité avec une electrophorèse sur gel d'agarose 2%, les résultats se sont avérés positifs (bande unique et de la bonne taille pour chacun des 6 échantillons).  [...]