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[Biologie Moléculaire] PCR: dépôts qui restent dans les puits lors de la migration

Le problème que j'ai est que je ne parviens pas à obtenir de bande à découper sur mes gels (1% agarose dans TAE). mes dépots semblent rester dans les puits, quelque soit la condition considérée.  [...] Piste 3. Controle positif (50ng du plasmide contenant le gène wt). On y devine bien une bande au bon PM, mais celle-ci reste bien trop faible pour être purifiée (et le but est de purifier la bande pour l'ADN patient).  [...]

[Biologie Moléculaire] contrôle positif PCR

je suis assistante ingénieur dans un laboratoire d recherche. j'ai un petit problème avec les contrôles positifs pour mes PCR. juste après quelque semaine, (si j'ai de la chance) la bande est très faible, mais il m'arrive de la perdre complètement.  [...] c'est de l'adn, genotypage à partir de bout de queue de souris. programme classique d'une PCr, on veut juste reconnaitre les animaux hétérozygotes (deux bandes) des wt (1 bande). C'est assez simple, mon contrôle positif doit avoir deux bande, mais souvent ça marche une seule fois et la semaine d'après les bandes ont disparu.  [...]

[Biochimie] contrôle interne pcr

Dans la colonne du contrôle positif, j'ai deux bandes. celle du contrôle interne (157 bp) et celle du contrôle positif(284 bp ). C'est là que je comprends pas bien, est ce que le gène (inv A) des salmonnelles a la même taille que la séquence de l'adn du contrôle positif reconnue par les primers.  [...] Car pour que la portion d'ADN recherchée soit amplifiée, il faut que ses extrémités soient complémentaires des primers. La bande de l'adn du contrôle positif doit être au même niveau que celle représentant le gène recherché sur le gel.  [...]

Concentration négative et résultat PCR

J'ai extrait des mitochondries à partir des myoblastes de souris, le culot qui s'est formé était petit, je l'ai resuspendu dans le réactif recommandé, en fait quand j'ai mesuré la concentration de mes échantillons en utilistant la méthode de BradFord, le spectro m'a indiqué des concentrations négatives,méme quand j'ai pris les valeurs de l'absorbance pour calculer les concentrations à partir de relation y= ax+b, les valeurs étaient négatives aussi, est ce que vous pourriez m'aider à expliquer ces valeurs négatives, s'il vous plait.   [...] Une deuxième chose,pour le teste de détection de mycoplasme basé sur une simple PCR,j'ai eu. les 3 bandes qui correspondent à mes échantillons étaient moins intenses que le controle négatif, je me suis dis que peut étre mes échantillons étaient inhibés, j'ai refait mon PCR mais j'ai eu le méme résultat.  [...]

[Biologie Moléculaire] contamination PCR

Si tu as une bande dans un contrôle négatif, c'est que tu as eu une amplification ce qui veut dire que y avait du template (de l'ADN matrice) dans ton tube.  [...] Ps. Tu peux toujours demander les tips et les tubes de qlq d'autres pour 1 manip, nettoie aussi bien ta pipette (a l alcool). Si on contrôle négatif est toujours positif, tu peux écarter ce problème là.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR positive puis négative

Essaie de travailler par moins d'échantillons, et sans faire de témoins positif si tu es sûr que ta PCR fonctionne et que tu manips consciencieusement, de façon à minimiser le risque de conta.  [...] Il est vrai que j'ai eu des faux positifs avec une bande qui apparait 100pb plus bas mais même en sa présence j'ai pu séquencer mon ADN et lorsque je 'ai refait cette manip en double, ma collègue et moi avanons eu tous les deux ce faux positif, ce qui me semble invalide l'hypothèse d'un contaminant.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

On a fait amplifier de l'ADN de certains de nos échantillons et on faisant migrer les produits sur gel, il s'est avéré que y a eu contamination (révélation d'une bande sur gel correspondant au contrôle négatif).  [...] Après il est aussi possible que les contaminations observées ne proviennent pas d'un des réactifs mais simplement du fait de la manipulation de l'ADN a proximité du contrôle négatif. Ca peut expliquer pourquoi dans une PCR sans ADN tout soit blanc.  [...]

[Biochimie] Commentaires et analyses d'une photo d'électrophorèse sur gel d'agarose après PCR

La seule chose que je pense pouvoir dire, est le fait que l'on voit apparaître une bande pour le contrôle négatif. Je pense donc que les amorces ont du trouvé le gène recherché sur l'ADN (qui est ici le gène ATPase) et donc un site pour se fixer.  [...] je pense que pour pouvoir aider, on aurait besoin de plus d'infos. Quelle sont les ADN différents utilisés Quant au contrôle négatif, de quel type de contrôle s'agit-il, que lui manque-t-il en théorie pour faire la PCR.  [...]

[Biotechnologie] bêta actine dans la PCR !!

si c'est une RT-PCR classique la béta actine sert de controle positif, le gène est forcément exprimé donc tu dois avoir une bande pour ce gène ceci te permet de conclure sur les autres gènes notamment dans le cas ou tu n'as pas de bande tu ne peux pas dire que c'est parce que l'ARN était dégradé etc car l'actine marché.  [...] ...2 émement l'actine peux te servire à semi-quantifié l'expression des autres gènes, l'actine est un gène dit de ménage ou housekeeping gene. Il est tout le temps transcrit à un niveau maximal donc si une bande observé est deux fois moins intense que la bande actine tu pourra dire est bien voila tel gène est deux fois moin exprimé que le gène actine etc.  [...]

[Biochimie] Expression protéique

La protéine est détectée par Western blot et le contrôle positif est correcte. A quel niveau sont sensé agir les régions régulatrices Lors de la traduction N'est ce pas un peu tard une fois que les ARNs sont synthétisés.  [...] L'ARN semble suffisamment exprimé puisqu'il est détecté assez clairement avec 30 cycles d'amplification. Sur WB j'obtiens deux bandes de tailles différentes pour mon contrôle positif mais seulement une bande très très haute dans le gel (très grosse protéine) comparé aux autres dans le reste de mes conditions.  [...]