• Forum - Bactéries, Compétentes, Membrane, ADN

cellules competentes

est ce que quelque un aurait des informations sur les cellules beta compétente de e coli.  [...] On dit que des bactéries sont compétentes lorsqu'elles présentent des trous dans leur membrane qui leur permet d'intégrer de l'ADN exogène. Ces bactéries sont notamment utilisées dans le contexte de transformation bactérienne, c'est-à-dire de l'introduction d'ADN (souvent sous la forme de plasmide), pour l'amplification de ce plasmide.  [...]

Intégration dans un plasmide

L'ADN circulaire pénètre plus facilement dans des bactéries (préparées pour la transformation. on dit qu'elles sont compétentes ) que l'ADN linéaire.  [...] Je ne pense pas qu'il soit possible d'insérer dans une bactérie hôte un ARN linéaire, sauf si on utilise un phage comme vecteur. Dans ce cas si, tes rendements sont drastiquement augmentés car la transformation de bactérie compétente est relativement peu rentable.  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur

Les bactéries contenant les plasmides sont mises en culture dans un grand volume (jusqu'à 2 litres de milieu de culture). Quand la concentration bactérienne atteint une valeur suffisante, on traite par un antibiotique (comme le chloramphénicol) qui empêche la croissance bactérienne sans affecter la réplication des plasmides.  [...] Les bactéries peuvent être placées dans certaines conditions physico-chimiques pour permettre aux plasmides d'être incorporés à l'intérieur de celles-ci. Les bactéries traitées et prêtes à recevoir l'ADN étranger sont appelées bactéries compétentes. L'incorporation des plasmides dans les bactéries est appelée transformation bactérienne.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

La mise en place de cette technique nécessite l'obtention d'ADNc simple brin. Pour cela, nous transformerons des bactéries compétentes avec notre banque d'ADNc. Ensuite, nous surinfecterons ces bactéries par le phage à ADN simple brin M13K07. Nos plasmides d'ADNc contiennent l'origine de réplication de ce phage, donc, quand il se répliquera (en ADN simple brin) nos plasmides d'ADNc seront eux aussi répliqués en ADN simples brins.  [...] Puis, ils seront électroporés dans des bactéries compétentes. Les bactéries transformées permettront de rendre les ADNc entièrement doubles brins. Cependant, pour ne pas avoir, lors du crible à tester individuellement chaque espèce d'ADNc de la banque, nous diviserons cette banque.  [...]

Expériences en génétique…

..) Sinon je sais qu'on peut mettre aussi l'adn et les bacteries ensemble mais les transformations (integration de l'adn externe dans le genome) sont rares, en general on ajoute du Na+ a l'ext pour perméabilisé la membrane cell.  [...] En biologie moléculaire, on utilise ces plasmides pour intégrer des morceaux d'ADN dans des bactéries rendues compétentes, c'est-à-dire perméables, l'ADN rentre tout seul dedans grâce à un choc électrique ou un choc thermique.  [...]

[Microbiologie] Lipopolysaccharide(LPS)

Par contre il est situé dans la membrane externe des bactéries Gram-, et chaque lyse bactérienne libère alors le LPS - d'où une toxicité secondaire (lyse causée par les mécanismes immuns) parfois violente et directement proportionnelle à l'importance de l'infection - au contraire des toxines protéiques.  [...] Les bactéries peuvent être placées dans certaines conditions physico-chimiques pour permettre aux plasmides d'être incorporés à l'intérieur de celles-ci. Les bactéries traitées et prêtes à recevoir l'ADN étranger sont appelées bactéries compétentes.  [...]

isolation d'un plasmide

On récupère la culture de bactérie que l'on va traiter avec un detergeant ionique, le SDS et une la base forte, la soude. Ceci va dégrader les membranes et dénaturer les macromolécules (protéines + acides nucléiques).  [...] Les bactéries compétentes utilisées pour la transformation et l'amplification ne possédent pas de plasmides... pour t'en rendre compte, fait, à partir d'une colonie, une culture de bactéries non transformées d'une part et transformées d'autre part... fait ensuite une miniprep d'ADN plasmidique.  [...]

[Microbiologie] transformation

je dois cloner les produits de digestion de la mutagenèse (insert ADN) dans le vecteur PGEX4T1 en transformant les bactéries compétentes DH5± J'ai trouvé des clones sur un milieu 2YT/AMP j'ai fait une miniprep pour extraire le plasmide recombinant simplement sur le gel les produits sont piégés dans le puits j'ai refait la manip à plusieurs reprises je trouve toujours le même résultat avec un smear Aidez moi que devrais je faire.  [...] ..encore faut-il avoir les primers). Quant au blocage dans le puit, c'est effectivement un soucis d'ADNg le plus souvent...mais que tu ne devrais pas rencontrer en miniprep. Peut-être es-tu un peu brutal au cours du protocol et du coup l'ADNg se détache des membranes...ce qui fait que tu le retrouves plus tard.  [...]

[Génétique] Help! tp génétique, analyse clonage

Comment les bactéries sont-elle rendues compétentes Par quelle technique Et qu'est-ce que la transformation précisément.  [...] Une bactérie compétente est dans ce cas précis une bactérie dont la membrane (ou la paroi) a été rendue perméable d'une telle manière qu'elle permet l'entrée d'ADN double-brin. Les façons les plus courantes sont l'électroporation (un choc électrique fait que la paroi/membrane sera trouée ) ou le choc thermique (même résultat, mais en appliquant des T°C différentes).  [...]

clonage qui ne fonctionne pas ? ratio ?

j'ai d'abord essayé de transformé 1µL du milieu de ligation pour 25µL de bacteries puis 10µL pour 50µL de bacteries mais aucune pousse bacterienne dans les deux cas, le controle positif fonctionne, donc les bacteries que j'ai rendu compétentes sont bien apte a recevoir le plasmide.  [...] @flyingbike. mon expérience perso c'est que la ligation proprement dite est rarement le problème. Quasiment tous les problèmes de ligation que j'ai vu sont en fait des problèmes de restriction ou de transformation (bactéries pas suffisamment compétentes).  [...]