• Forum - Bactéries, Compétentes, Compétences

[Biologie Moléculaire] bactéries compétentes

Pensez-vous que le stockage à -20°C pendant 48h (au lieu de -80°C) de bactéries compétentes pourrait leur faire perdre toutes leurs compétences.  [...] Il parait meme que les cellules chimiocompetentes deviennent meilleures apres 24 - 48h au frigo.  [...]

clonage qui ne fonctionne pas ? ratio ?

j'ai d'abord essayé de transformé 1µL du milieu de ligation pour 25µL de bacteries puis 10µL pour 50µL de bacteries mais aucune pousse bacterienne dans les deux cas, le controle positif fonctionne, donc les bacteries que j'ai rendu compétentes sont bien apte a recevoir le plasmide.  [...] @flyingbike. mon expérience perso c'est que la ligation proprement dite est rarement le problème. Quasiment tous les problèmes de ligation que j'ai vu sont en fait des problèmes de restriction ou de transformation (bactéries pas suffisamment compétentes).  [...]

[Microbiologie] Lipopolysaccharide(LPS)

Arf tout est relatif. On peut mourir des deux. Niveau occurrence, c'est pas vraiment comparable non plus hein. La toxine tétanique est sécrétée et ne se trouve pas à la surface de la bactérie.  [...] Les bactéries peuvent être placées dans certaines conditions physico-chimiques pour permettre aux plasmides d'être incorporés à l'intérieur de celles-ci. Les bactéries traitées et prêtes à recevoir l'ADN étranger sont appelées bactéries compétentes.  [...]

[Biologie Moléculaire] bactéries compétentes

Cependant, j'aimerai savoir si j'augmente ce temps d'incubation (par ex 1 heure au lieu de 15 min) quelles seront les conséquences sur mes bactéries compétentes.  [...] ok car moi aussi je partais manger pendant ce temps d'incubation jusqu'a ce qu'on me fasse remarquer que je ne respectais pas le protocole et que cela pouvais avoir de graves conséquences sur la compétence de mes bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole pour une ligature + tranformation ?

Voilà, je continue gaiement mon stage à Barcelone, mais maintenant j'ai un petit souci. je dois faire une construction plasmidique toute simple, donc digestion de l'insert et du vecteur par 2 enzymes de restriction, ligature, et puis transformation de bactéries E. coli.  [...] Ensuite ce matin j'ai transformé mes bactéries compétentes, là elles sont mises à pousser sur des boîtes avec ATB, IPTG et X-Gal. On va voir ce que ça donne.  [...]

[Biochimie] Mutagénèse dirigée

D'apres ce que tu as décris, il me semble que tu essayes de transformer les bactéries avec seulement le produit de PCR et que tu ne mets pas le plasmide. Ce dernier, qui doit surement contenir un gène de résistance aux antibiotiques, ne peut donc pas empêcher les bactéries de mourir au contact du milieu LB+ampicilline.  [...] A ne pas négliger, le fait que tu es choisi d'autres bactéries que celle du kit. Sont-elles compétentes pour une transformation par choc thermique Est-ce les mêmes que celles utilisées pour les clonages qui ont fonctionné précédemment.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage dans le pGEM-T easy vector.

A mon avis ce qui c'est passé c'est surtout que votre transformation a foiré et que des bactéries ampi résistantes vides ont poussé quand l'ampi a commencé a devenir limitant.  [...] Je n'ai jamais utilisé de bactéries éléctro compétentes donc je ne peux pas vous aider à optimiser vos transformation. J'ai une grosse préférence pour les chimio compétentes.  [...]

[Génétique] Help! tp génétique, analyse clonage

Comment les bactéries sont-elle rendues compétentes Par quelle technique Et qu'est-ce que la transformation précisément.  [...] Questions. jJe crois que je faisais une erreur en associant la transformation des bactéries et leur compétences. Quest ce qu'une cellule compétente C'est une cellule transformée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

La mise en place de cette technique nécessite l'obtention d'ADNc simple brin. Pour cela, nous transformerons des bactéries compétentes avec notre banque d'ADNc. Ensuite, nous surinfecterons ces bactéries par le phage à ADN simple brin M13K07. Nos plasmides d'ADNc contiennent l'origine de réplication de ce phage, donc, quand il se répliquera (en ADN simple brin) nos plasmides d'ADNc seront eux aussi répliqués en ADN simples brins.  [...] Puis, ils seront électroporés dans des bactéries compétentes. Les bactéries transformées permettront de rendre les ADNc entièrement doubles brins. Cependant, pour ne pas avoir, lors du crible à tester individuellement chaque espèce d'ADNc de la banque, nous diviserons cette banque.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tp biomol

Donc en fait dans le 1er on a transforme des bacteries E.Coli en leur inserant un plasmide pBR322. On obtient donc des bacteries competentes resistantes a l'ampiciline.  [...] Ensuite on a integre le melange avec ligase et sans ligase dans les bacteries competentes preparees prealablement. on les met en culture sur X-gal et ampiciline. On observe des colonnies blanches et bleues donc en fait ca c'est pas rapport a l'insert, si il vient s'inserer au niveau du lacZ la B-gal nest pas fonctionnelle et du coup on a des colonnies blanches, au cas contraire elles sont blanches.  [...]