• Forum - Bactéries, Colonies, Résistance

[Microbiologie] géne de resistance

Culture des bactéries en présence de l'ATB dilué (voir très dilué). On augmente la concentration de l'ATB au fur et à mesure, puis on les cultive sur agar avec la dose standard d'ATB. Il y a généralement plusieurs bactéries/colonies qui ont développé la résistance.  [...] Ton raisonement est simpliste, certains antibiotiques n'agissent qu'en fonction du type de Gram, simplement car la membrane bactérienne n'a pas les meme spécificités. Dans ce cas la il n'y a pas de gene de resistance.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

dc bien que jai une petite etape de selection dans des cellules bacteriennes (liee au fait que mon plasmide a une resistance AB), mon promoteur doit etre eucaryote.  [...] Par pression de selection AB sur les bacteries, je vais pouvoir selectionner uniquement les colonies bact qui ont integrer mon plasmide (qui a un gene re resistance a la selection).  [...]

Efficacité d'antibiotiques couplés

Oui c'est pour ça que je trouve ça bête les articles ou cours qui mettent que si on utilise un AB sur des colonies qui présentent quelques résistances, on les sélectionne, car de toutes façon, si l'on avait pas utilisé l'antibiotique au moins pour les bactéries qui n'avaient pas muté, on aurait pris le risque que les résistantes transmettent encore plus leur résistance par les ponts de résistance.  [...] La mutation qui confère une résistance est rare et est noyée dans la population non résistante. En laissant évoluer cette population sans pression antibiotique, il y aura très peu de résistance et elle restera sensible aux antibiotiques (sera éliminée lors de son utilisation) tandis que si on les utilise régulièrement, on sélectionne des populations résistantes ( en dehors du foyer infectieux traité ) et on finira par ne plus avoir que des bactéries résistantes.  [...]

[Microbiologie] Agitation, repiquage

Aussi, lorsque l'on veut détecter des bactéries ayant été transformées (ayant capturé un plasmide contenant un gène de résistance à l'ampicilline) sur un milieu sélectif contenant donc de l'ampicilline et qu'on repique ensuite les colonies qui se sont développées, il vaut mieux repiquer des colonies de taille intermédiaire et pas des colonies trop volumineuses. Pourquoi Un lien avec les mutations.  [...] Pour ce qui est du choix des colonies poussant sur milieu sélectif en général il faut essayer de prendre et les grosses colonies, et les petites, ça évite un biais dans les résultats.  [...]

[Biochimie] Problème de transformation

Pour savoir ce que c'est qui pousse... des colonies transparentes, aucune idée. mais ca peut être des contaminant. certaines bactéries peuvent développer rapidement une résistance à la kanamycine, surtout dans un labo ou cet antibio est utilisé couramment.  [...] D'où l'intéret de toujours vérifier que les colonies que tu isoles sont résistantes en raison de la présence du plasmide, et non d'une mutation spontanée. Ceci dit, si tes bactéries 'transparentes' ne poussent pas quand tu les repiques, ca veut dire que c'est des faux positifs.  [...]

[Biologie Moléculaire] Le plasmide a t'il l'insert?

Donc vérifier que tes bactéries sans plasmide sont bien sensibles aux deux antibios, et d'abord faire pousser les bactéries transformées sur strept, puis repiquer les colonies en les identifiant sur ampicilline, puis tester par miniprep celles qui ne poussent pas sur ampicilline.  [...] C'est l'insert qui porte le gène de résistance à la néomycine. Donc, si j'ai des colonies sur LB+strepto+néo, c'est que mon plasmide est recombiné et est dans les bactéries.  [...]

Les colonies satellites dans un milieu aditionné d'Ampicilline

C'est tout simplement parce que tes bactéries résistances à l'amp secrètent une beta-lactamase dans le milieu. Y a donc des bactéries non résistantes qui poussent autour (colonies sat).  [...] La Beta-lactamase diffuse autour des colonies résistantes, et ça permet aux bactéries non résistantes de pousser sous forme de colonies satellites, ça arrive, mais ceci reste à vérifier.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination transformation

J'ai fais une transformation en bactéries Top10F' pour effectuer une recombinaison homologue entre un plasmide conférant une résistance ampicilline et un ADNg. A l'issu de la transformation de petites colonies sont apparues sur la gélose après 24h d'incubation...jusque là tout est normal.  [...] non pas du tout...je ne veux pas intégrer le gène de résistance. En fait j'ai des bactéries résistantes à l'ampi qui poussent sur mes boites ainsi qu'en culture liquide et qui n'ont rien à voir avec mes plasmides ou d'autres plasmides manipulés au labo.  [...]

aide pour culture bactérie

Pour récuperer des bactéries c'est assez simple. Vous prenez une boite de culture avec du milieu, vous mettez vos doigts dessus (pas fraichement lavés), vous incubez à 37°C durant une nuit (ou deux) et vous devriez voir des colonies. Vous devriez trouver des colonies jaunes qui correspondent à staphylococcus aureus (staphylocoque doré).  [...] Une autre méthode facile pour cultiver des bactéries est de partir d'un yaourt. quelque millilitres dilués et étalés sur une boite devrait vous fournir des belles colonies de bactéries lactiques. Moins contraignantes que les Staph, les bactéries lactiques sont par contre plus résistantes à un certain nombre d'antibiotiques.  [...]

Plasmide recombinant

En fait, dans le plasmide, on place souvent un premier gene de resistance à un antibiotique dans la région de recombinaison. Ceci pour pouvoir selectionner les vecteurs recombinants. Faciel et instinctif je dirais.  [...] cette sélection s'effectue en étalant les bactéries transféctées sur une boite d'agar contenant la Tet, toutes les colonies obtenues de cette façon contiennent un plasmide.ces colonies résistantes sont ensuites téstées pr leur capacité de croitre sur un milieu contenent l'Amp.  [...]