• Forum - Bactérie, Séquence, Intérêt

[Biotechnologie] Bioluminescence par bactéries recombinées

A partir d'un vecteur (plasmide, yac, bac...) vous transférer la séquence d'intérêt depuis la bactérie naturellement luminescente. POur se faire, clivez la séquence d'intérêt à l'enzyme de restriction adaptée (il y en a à foison selon les coupes franches ou cohésives).  [...] Je pense aussi que pour completer le tout sur comment elle peut réponse aux métaux, il faut je pense se referer à la régulation de l'opéron fer qui code pour la ferritine ( il me semble ) et qui répond au fer grace a des sequence Iron Responsive.  [...]

[Microbiologie] Un plasmide ouvert peut-il être fonctionnel?

[Microbiologie] Un plasmide ouvert peut-il être fonctionnel.   [...] On a un plasmide circulaire avec x propriétés, on l'ouvre par digestion à un endroit vierge (sans gène d'intérêt) et on l'insère dans une bactérie. Est-ce que ce plasmide (linéarisé) est encore fonctionnel Personnellement j'imagine qu'un plasmide tronqué ça fait un peu désordre puis bon on a quand même séparé une séquence en deux (toute séquence à un intérêt) en petit 2 je pense également que des exonucléases bactériennes pourraient l'éliminer.  [...]

[Biologie Moléculaire] Librairie de génes !!

Bonjour tout le monde, c'est quoi une librairie de génes elles peut être façonnées par des souches d' E.coli...merci bien.   [...] Pour moi c'est comme une banque de gènes. C'est à dire qu'on a trouvé à quoi le gène correspond et on le conserve dans une banque. Pour cela on introduit la séquence à l'aide d'un plasmide dans une bactérie souvent E.coli (parce qu'on l'aime bien.). Et puis quand on en a besoin, on décongèle et la bactérie se multiplie et amplifie la séquence d'intérêt que l'on récupère et voilà.  [...]

[Biotechnologie] Principe de la PCR

la ou les séquences qui présentent un intérêt, qu'il s'agisse de la séquence d'un gène ou de séquences non codantes (introns, transposons, mini.  [...] Il est recommandé de rajouter un cycle final d'élongation à 72°C, notamment lorsque la séquence d'intérêt est de grande taille (supérieure à 1.  [...]

isolation d'un plasmide

S'assurer que la bactérie ne possède pas de plasmide avant la transformation Et bien en principe, elles ne possèdent pas le plasmide d'intéret (logique). Tout autre plasmide nous est indifférent. Ce que l'on fait en pratique, c'est que l'on verifie après coup que les bactéries que l'on a selectionnées portent bien l'insert d'intéret (digestion de restriction, séquencage).  [...] Le fait qu'un plasmide existerait déjà dnas la bactérie ne va t'il pas diminuer la probabilité que celle ci incorpore notre plasmide d'intérêt.  [...]

Probleme sequençage = faible homologie

j'ai sous-cloné un gène d'intérêt dans des vecteurs bactériens (souche xl1-blue) mais après séquençage (société externe), mon taux d'homologie avec la séquence d'origine et parfois de 100%, 95% voir même 30%.  [...] Si tu as seulement 30% d'identité de séquence, c'est sans doute que tu as pêché le mauvais gène. Il faut sans doute redesigner des primers plus spécifiques.  [...]

[Génétique] Comment identifier les promoteurs contenant une sequence consensus d'intéret

Comment identifier les promoteurs contenant une sequence consensus d'intéret.  [...] Je connais la séquence consensus d'un facteur de transcription. J'aimerai identifier dans le génome humain l'ensemble des promoteurs qui possédent cette séquence.  [...]

Isoler une région d'un génome à partir d'un BAC

En d'autres termes, comment faire pour isoler une région de 10 kb environ, (amont du gene d'intéret + gene d'intéret + aval) à partir d'un BAC ( on connait la séquence complète du BAC ).  [...] Si une PCR est négative, c'est que la BAC ne contient pas la séquence à amplifier. Donc il faut que tu fasses attention à dessiner tes primers bien au bord de ta zone d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

je ne comprends pas comment ça se fait que si on place un gène rapporteur à la suite d'une séquence régulatrice on va alors avoir la localisation du rapporteur(GFP) de notre gène d'intérêt.  [...] Pour moi, pour avoir la localisation de GFP il faudrait que dans le gène GFP, il y ait une séquence comme NLS(destination vers noyau par exemple), qui serait donc la même que celle de notre gène d'intérêt.  [...]

[Biotechnologie] Technique de screening

On a à la base une librairie de phage contenant différents morceaux d'ADN. On est intéressé par l'un de ces fragments, dont on connait une partie de la séquence. Donc on réparti tout ça sur un gazon bactérien et on incube. Les phages qui ont infecté des bactéries vont créer des plaques.  [...] Après incubation, on place une membrane en nitrocellulose sur le dessus, en marquant son orientation et ensuite on va essayer de détecter les phages avec des sonde ADN radio-marquées (dirigées contre la séquence d'intérêt). Ainsi, on sait où se trouve notre phage dans notre gazon bactérien et on peut le prélever.  [...]