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DNA ligase

Bonjour à tous, j'ai une petite question concernant la DNA ligase. On dit qu'elle va refermer le lien phosphodiester entre 2 fragments d'Okasaki par exemple. Je ne comprends pas très bien, la réaction de condensation lorsque l'ADN polymérase ajoute des nucléotides se fait toute seule, pourquoi ici il faudrait l'intervention en plus d'une enzyme pour faire ce boulot merci d'avance.  [...] regarde un schéma de la réplication, tu verras que le brin tardif est synthétisé par fragments (du fait que la progression du complexe est inverse au sens de réplication 5' 3'). Ces fragments doivent être liés entre eux par la ligase. Entre les nucléotides, la liaison est réalisée lors de l'incorporation de ceux ci par la polymérise, donc pas besoin de ligase.  [...]

methylation des histones

La différence entre le brin directe et indirecte est que le brin indirecte n'est pas continue, il est fragmenté(ce sont les fragments d'okazaki). C'est parce que en fait, si mes souvenirs sont bons, l'ADN polymerase ne se déplace que dans le sens 3'-5'( et synthétise donc dans le sens 5'-3').  [...] De ce fait il y'aura au niveau d'un brin une synthèse continue (celui qui va de 3'vers 5') puis au niveau de l'autre une synthèse discontinue ( L'ADN poly va se déplace de l'hélicase jusqu'à l'extrémité 5' et comme l'hélicase avance il y'aura des fragments d'ADN qui vont se formé et qui vont être lié par une autre enzyme).  [...]

[Biologie Moléculaire] La télomérase

La télomérase est une enzyme exprimée par les cellules souches et cellules germinales et permet de conserver l'intégrité du chromosome en évitant le raccourcissement des télomères. Ainsi les cellules filles provenant de ces types de cellules mères auront des chromosomes neufs, non altérés.  [...] Effectivement le brin avancé n'est pas caractérisé par la présence de fragments d'Okazaki, mais il faut savoir que de chaque côté de la fourche de réplication il y a un brin avancé et un brin retardé, en effet il y a deux fourches de réplication car la réplication est bi-directionnelle.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

La vérification du clivage des ADNc par une enzyme de restriction peut se faire si le clivage génère des fragments de taille différente et suffisamment longs. Ainsi par migration sur gel d'agarose, la présence des bandes d'intérêt permet de valider le clivage.  [...] L'ensemble me parait bien. Pour la ligase que tu utilises, 1 µl correspond à combien d'unités Pour ma part, ce qui marchait pour un sous-clonage était un rapport 3.1 (insert.vecteur) avec 300 ng de vecteur, 200 U de ligase fraîchement entamée, overnight à température ambiante.   [...]

[Biochimie] adn : réplication , transcription

.LA synthese DE L'ADN se fait dans 2 sens dans le sens 5'_3'se fait la synthese continue de brin avancé et dans le sens 3'_5' va se fair la synthese discontinue de brin dit retardé ou on utilise les fragments d'okazaki.  [...] la synthese discontinue necessite la présence de pt fragments d'ARN APRES ILS SERONT REMPLACéES PAR DES FRAGMENTS D'ADN synthetisés par la polymérase 3 a la fin on obtient plusieurs fragments appelés d'okazaki,en fin vient une autre enzyme la ligase qui met des liaisons entr tt les fragments d'okazaki et on obtient l'autr brin (brin retardé ).  [...]

[Génétique] Thérapie génique: synthétiser le gène correcteur

Et le nombre et la taille des fragments d'ADN obtenus avec une enzymes de restriction dépendent du nombre de fois où la séquence reconnue par l'enzyme est répétée au sein de la molécule d'ADN. Et donc le choix d'une enzyme de restriction dépend de la taille des fragments que l'on désire.  [...] Merci beaucoup. J'ai une autre question. Comment fait-on pour insérer le fragment d'adn obtenu par les enzymes de restriction dans le vecteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN pol I

Je suis d'accord mais donc partant de ce postulat, cela voudrait dire que la polymérase qui synthétise le premier fragments d'Okazaki du brin avance reviendrait en arrière pour venir éliminer l'amorce.  [...] ah, on met peut-être le doigt sur le problème. les fragments d'Okazaki du brin avancé, ça ne veux rien dire, c'est l'opposé l'un de l'autre. On a pas le brin avancé en haut et le brin trainard en bas, chaque brin qui se forme dans la fourche est constitué par un brin avancé et un brin trainard.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR? - Page 2

Pour l'hybridation des amorces, je prends cette température quelque soient les Tm, qui de toute façon sont beaucoup plus élevés. En général, amorces de 22nt avec le résidu muté au milieu.   [...] Pour la Platinium Taq Polymerase, je connais pas cette enzyme. Mais j'aurais tendance à penser que n'importe quelle enzyme proofreading (et qui ajoute pas de A) capable de faire des longs fragments peut convenir.  [...]

[Biologie Cellulaire] Questions diverses sur l'ADN

Il nous a dit que l'enzyme Topoisomérase surenroulai l'ADN et je viens de lire pourtant dans un cours que la même enzyme le déroule. Est ce normal.  [...] Les topoisomérases I sont des enzymes de la classe des gyrases. c'est à dire qu'elles permettent le relâchement des supertours négatifs (W-), entraînant une augmentation de l'enlacement L d'un tour à la fois (car L=T+W).  [...]

[Biochimie] Réplication/Transcription particularités communes

Je me posais cette question et je ne savais pas trop quoi répondre à part que la synthèse s'effectue dans le même sens 5'-3'.   [...] Une enzyme processive est une enzyme qui est liée à l'ADN. moins une polymérase est processive plus elle aura tendance à se décrocher de l'ADN donc à synthétiser de petits fragments.  [...]