• Forum - ARNm, Vecteur, Clonage

[Génétique] Obtention de sonde plasmide

Le prof nous demande de simuler l'insertion dans un vecteur de clonage d'une sonde à partir de l'ARNm de la protéine.  [...] 2) Je ne trouve aucun enzyme de restriction qui corresponde entre mon ARNm et les différents vecteur de clonage disponible sur le marché. Comment faire Selon mon prof c'est très simple (pour lui tout est simple) il suffit juste de choisir un plasmide et deux enzymes de restriction au pif, et de rajouter les nucleotides correspondant aux 2 bout de ma sonde. Comment je fais ca moi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

On peut volontairement synthétiser un brin d'ADN à partir d'un ARN en particulier de l'ARNm eucaryotique de façon à avoir un brin d'ADNc (ADN complémentaire) que l'on peut introduire dans un vecteur en vue d'un clonage. Cet ADNc une fois traduit dans des cellules procaryotiques donne un ARNm sans introns qui peut être traduit sans trops de problèmes.  [...] Ces ADNc peuvent aussi servir de sondes radioactive (Northern ou Southern) pour détecter, voir doser un ARNm correspondant.  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur de clonage et le vecteur d'expression

Un vecteur de clonage est un plasmide ayant une réplication autonome dans la cellule hôte et un site multiple de clonage afin de cloner un fragment d'ADN d'intérêt.  [...] I) Définition des vecteurs. Petites molécules d'ADN possédant leur propre système de réplication. Ils servent de véhicule pour le clonage génique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

..) ainsi que leur force, la présence d'étiquette peptidique ou protéique (qui permettent de faire de la purification protéique). Voilà pour les caractéristiques générales d'un vecteur. Selon les différentes caractéristiques tu auras donc des plasmides dits d'expression, d'autres de clonage.  [...] pBR322 est vraiment le vecteur de base. C'est je pense, le premier que l'on a du vous présenter. C'est un vecteur de clonage qui contient simplement. une ori de réplication, un gène de résistance (Amp r pour les procaryote, Tet r pour les eucaryotes), et une cassette de clonage.  [...]

[Biotechnologie] vecteur de clonage et vecteur d'expression

Pourriez-vous m'expliquer la différence entre un vecteur de clonage et un vecteur d'expression.  [...] CA peut être plus ou moins similaire, a part que le vecteur de clonage est fait pour être réplicable en bactéries (comme une sorte de vecteur navette ou on insère ce que l'on veut pour l'amplifier, c'est a dire qu'il contient des origines de réplication, des sites de clonages, etc), tandis que le vecteur d'expression est lui équipé des éléments nécessaires a l'expression de ta séquence, que ce soit expression procaryote ou eucaryote.  [...]

vecteur de clonage et d'expression

Y a-il une différence entre vecteur d'expression et vecteur de clonage.  [...] Un vecteur de clonage permet uniquement le transport et la multiplication de l'ADN inséré dans une cellule hôte.  [...]

Questions sur les éléments d'un vecteur de clonage

J'ai quelques questions concernant les différents éléments d'un vecteur de clonage type plasmide.  [...] -Une fois la transfection effectuée, on doit sélectionner les bactéries ayant bien reçus ce plasmide sur milieu avec antibiotique. Encore une fois, ce fameux codon stop empêche selon moi la transcription du gène de résistance et donc ne permet pas aux bactéries de devenir résistantes.   [...]

vecteurs

bonjour,quelqu'un pourriat il m'indiquer la différence entre un vecteur d'expression et un vecteur de clonage merci beaucoup.  [...] un vecteur de clonage a pour fonction d'amplifier un bout d'ADN (codant pour un gene la plupart du temps), ca correspond typiquement a un plasmide qui possede les sequences necessaires de selection et de replication.  [...]

[Biochimie] Etude des partenaires protéiques : Co-Immunoprécipitation, Tap-Tag et double hybride

pour créer une protéine de fusion, il te faut les cDNA des deux protéines. Tu les insere dans un vecteur à la suite, en prenant soin de les mettre en phase et en supprimant le codon stop de la premiere, comme ça tout est traduit en une fois. A ma conaissance on fait du double hybride chez la levure puisque ca n'est pas un procaryote.  [...] Et le vecteur utilisé pour le clonage, de quoi s'agit-il Plasmide, cosmide, YAC Et comment ce vecteur s'exprime chez la levure Le gène rapporteur, il se situe où Il faut forcément que l'organisme qui exprime les protéines fusions soit un eucaryotes.  [...]

Vecteur de clonage, PCR et vecteur d'expression

Voilà, peux t-on faire une PCR sur un vecteur de clonage comportant le gène d'intérêt c'est pour le clonage d'une enzyme. Ils parlent de strands (anglais) de plasmides qui ont été amplifiés par PCR dans un premier temps mais je ne sais pas si c'est possible directement sur un vecteur de clonage Le gène d'intérêt est lié au gène GST (gluthation transférase).  [...] 1. il faut changer de plasmide, refaire un clonage en faisant une fusion avec AD ou BD et donc re introduire des erreurs potentielles indépendantes du premier clonage.  [...]