• Forum - ARNm, Niveau, Sonde

Etudier l'expression d'ARN non codants

En ce qui concerne les ARNm il est facile de répondre le western blot puisqu'il y aura une protéine. Ou bien la RT-PCR avec une sonde poly-T puisqu'ils ont une queue poly-A (pour la plupart).  [...] Mais en ce qui concerne les ARN sans queue poly-A, par exemple les ARNm d'histone ou bien des longs ARN non codants comment faire au niveau de la RT-PCR Pas de sonde poly-T possible du coup.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN antisens à partir d'un fragment de gène

Dans un exon du gène. l'ADN complémentaire provient d'une rétrotranscription d'un ARNm, donc épissé, donc si on veut faire une sonde dans le gène, il faut que celle-ci soit au niveau d'un exon, si elle tombe dans un intron elle pourrait ne pas se retrouver dans l'ARNm et donc dans l'ADNc.  [...] Ce plasmide sera utile car fournisseur de sondes pour des Northern blot (Southern blot pour de l'ARN et non plus de l'ADN) ou de la transcription traduction artificielle comme expliqué ci-dessus.  [...]

[Microbiologie] le screening

bonjour a tous svp j'ai besoin daide,j'ai un exposé sur les methodes de recherche de nouvelles souches et je ne comprend pas c quoi le screening et il contient combien d'etapes j'ai trouvé qu'il ya un screening primaire et secondaire alors que je sais meme pas comment ça se deroule.   [...] Par hybridation sur colonies. avec une sonde spécifique d'un ARNm que tu cherches dans ta banque.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

Quel est le nom svp de la technique qui utilise l'hybridation d'une sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse.  [...] Ces ADNc peuvent aussi servir de sondes radioactive (Northern ou Southern) pour détecter, voir doser un ARNm correspondant.  [...]

Un problème de northern blot !

Les chercheurs de la publication réalisent un northern blot pour mettre en évidence la présence d'ARNm patB (hybridé avec une sonde), mais réalisent dans un second temps un northern blot témoin à l'aide d'ARNr 23S. Les données concernant l'ARNm patB sont ensuite dits normalisés par l'ARNr 23S et livrés sous forme de graphique.  [...] bref cela te sert a t'assurer que les variations eventuelles (ou l'absence de variations) sont bien liees a des regulations de l'ARNm et non pas a des problemes techniques lors du Northen.  [...]

Northern Blot

Sachant qu'au départ j'ai une sonde ADN complémentaire à l'ARNm étudié.  [...] Pour le northern-blot, tu fais directement migrer tes ARN purifiés ou non (soit des ARNtotaux, soit des ARN polyA+) sur gel d'agarose. Tu transfert sur une membrane et tu hybrides avec ta sonde.  [...]

[Biologie Moléculaire] les puces à ADN

lors de la préparation d'une puce, il est noté que les ADNc (obtenu à partir des ARNm sont marqués, un en rouge et l'autre en vert )dont on veut comparer l'expression sont mélangés et placés sur la matrice d'ADN simple brin déposée (la sonde).  [...] c) Le puits est rouge. L'ARNm n'est exprimé que dans les cellules cancéreuses. Le gène correspondant y est donc activé (alors qu'il était inhibé dans la cellule saine, voir absent si il n'y a pas eu mutation).  [...]

hybridation in situ : préparation de sonde ARN

Imaginons que la sonde ne s'apparie pas (car absence de l'ARNm cible), on va quand même voir de la fluorescence au microscope vu qu'on a marqué la sonde, comment alors savoir si on voit la sonde libre ou appariée à son ARNm complémentaire À moins que ça soit fluorescent que si c'est double brin.  [...] En fait, j'ai demandé pour la colorimétrie, mais un équivalent comme technique (au niveau de la simplicité opératoire, de la mise en oeuvre, même si le substrat doit être fait en salle blanche...), avec un solvant (l'eau serait l'idéale)... comme par exemple, je dis une connerie.  [...]

[Biotechnologie] Tp rt-pcr

J'allé dire la même chose, on peut fabriquer de l'ADNc en vu de faire une sonde, ou alors on utilise la RT-PCR en vu de séparer les l'ARNm des autres ARN en synthétisant de l'ADNc en appareillant un fragment dT(qui est complémentaire a la queue poly A de l'ARNm) qui sert d'amorce a la RT.  [...] je pense effectivement à montrer toutes ces choses, mais mon problème se situe plutôt au niveau des transcrits ciblés (quel gène cibler dans quelle lignée quel transcrits prendre en exemple).  [...]

hysterectomie voie basse le post op?

Les 3 premiers jours ont été quand même pénibles, morphine pendant 48 heures+sonde urinaire, j'avais surtout mal dans le bas du dos ( dû surement à la position durant l'opération..) maintenant et depuis qu'ils m'ont enlevé la sonde, j'ai une gêne au niveau de la vessie, j'ai l'impression d'avoir envie d'aller au wc tout le temps.  [...] Depuis mon retour, c'est pareil pour la gêne au niveau vessie, suis même allée voir mon généraliste pour voir s'il n'y avait pas une infection mais tout a l'air normal et elle m'a dit qu'il s'agissait des suites normales de l'opération sauf si ça brûle, ou que les urines sont foncées.  [...]