• Forum - ARN, Phase aqueuse, ADN

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

En revanche, pour l'extraction d'ADN avec du phénol basique, c'est pas vraiment clair. Des sites comme http.//www.chups.jussieu.fr/polys/bi...Y.Chp.7.3.html disent que l'ARN et l'ADN sont en phase aqueuse (mais dans ce cas, qu'est ce qui élimine l'arn) mais sinon, implicitement, on pense que l'ARN est dans la phase organique (d'où la purification différentiel des acides nucléiques en fonction du pH).  [...] En fait, il faut savoir que les ARN sont sensibles au pH alcalin et en général, l'extraction ADN se fait en phenol/Chloroforme/IAA à pH 8 et nous aurons l'ADN en phase aqueuse avec les ARN endommagés, ce qui ne gêne pas pour certaines analyses mais pas pour d'autres d'où l'action de RNase dans certains cas.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

Désolé mais tu te trompes, le trizole ne permet pas de séparer l'ADN de l'ARN. les protéines ne sont pas dans la phase phénolique mais dans l'anneau dont tu parles à l'interphase avec la phase aqueuse qui contien tous les acides nucléiques.  [...] J'ai dû mal m'exprimer, je sais que le trizol ne permet pas de les séparer, mais qu'il lyse seulement les cellules. Au labo dans lequel je suis on m'a pourtant expliqué que le colorant présent dans le trizol était soluble dans les solvant organique, ce qui fait qu'il se retrouve en bas (puisque visuellement j'ai bien une phase organique rose), que l'anneau du milieu représentait l'ADN, et la phase aqueuse en haut regroupait les ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN ARN extraction

J'ai un petit problème en TP de biologie moléculaire, c'est lors de l'extraction de l'ADN et de l'ARN. Ma question est. pourquoi l'ADN, à pH basique se retrouve en phase aqueuse, et pourquoi l'ARN se retrouve en phase aqueuse (tous les 2 lors de l'extraction bien entendu).  [...] Merci pour la réponse. On m'a dit qu'il y avait une histoire d'histones qui seraient plus ou moins attachées en fonction du pH, ce qui permettrai de rendre soluble ou non l'ADN en phase aqueuse car la présence d'histones favoriserait la solubilité en phase organique.  [...]

demande d'infos!!! extraction de l'ADN

Quand tu as ta sauce d'ADN, tu utilises un alcool (style éthanol) pour précipiter ton ADN (car l'éthanol est hydrophobe). Tu utilises ensuite des ions chargés positivement (NH3+,...) pour rapprocher les différentes molécules d'ADN (qui sont chargée - à cause de leurs phosphates) et ça permet le regroupement des ADN entre eux, ceux qui les rend visibles.  [...] - Après avoir placé le melange contenu cellulaire/phenol, il faut agiter afin que l'ADN puisse se retrouver dans la phase aqueuse que l'on recupère après avoir centrifugé. 2 phases sont visibles. la phase aqueuse au dessus contenant l'ADN, la phase organique contenant l'ARN et l'interphase contenant les protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

En fait on a ajouté à l'echantillon d'hypophyse 800 µl de Trizol. Aprés homogeinisation, on a incubé pendant 5mn. Ajout de chloroforme (incubation 3mn) et centrifugation à 12 000 tours pendant 15mn à 4°C. On a obtenu une phase aqueuse transparente contenant L'ARN et une phase rouge contenant l'ADN et les proteines.  [...] Après avoir récupéré la phase rouge contenant l'ADN et les protéines, on a ajouté 300µl d'éthanol 100% pour précipiter l'ADN. Après incubation 3mn, on centrifuge à 4600 tours pendant 5 mn. On prélève la phase aqueuse à laquelle on ajoute 1ml d'isopropanol pour précipiter les protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN plasmidique

Pour le phenol, il se trouve qu'avant il fallait le saturé soit même et maintenant il s'achète tout fait, enfin saturé quoi. Pour l'extraction d'ADN on utilise du phénol saturé avec du tris et pour l'extraction d'ARN avec de l'eau. A ce que l'on m'a dit, les ARN reste dans la phase aqueuse et les protéines resteraient dégradées à l'interphase.  [...] SDS 3% me semble un peu beaucoup. De mémoire ça ne doit pas excéder 1%. 15 minutes, c'est long. 5 minutes suffisent. Quant à la question de fond qui est de savoir si la lyse est optimale, la réponse est oui à condition d'avoir bien resuspendu vos bactéries dans la solution glucose-EDTA-RNase (n'oubliez pas la RNase, sinon vous allez vous ramasser des ARNs qui vont vous embêtez).   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN ethanol 70%

Je prépare des TP de biologie moleculaire à la fac, dont un sur l'extraction des ARN. Après avoir extrait l'ARN des cellules avec du TRIZOL, on obtient 2 phases, la phase organique (phase inferieure avec phénol et chloroforme) et une phase aqueuse avec les ARN.  [...] Peut on dire que les ARN sont dans la phase aqueuse parce qu'ils sont polaire.  [...]

TE dans phenol-chloroforme

Au contraire, je dilue mon ADN avec du TE pH 8.5 pour être sûre que mon ADN reste soluble dans la phase aqueuse.  [...] En même temps, il me semble qu'on utilise du phénol acide quand on bosse avec des ARN, mais là je ne suis plus du tout compétente.  [...]

[Biologie Moléculaire] biologie moléculaire

Bonsoir, en biologie moléculaire nous avons étudié l'extraction de l'ADN, l'ARN et des plasmides. Bon l'ADN c'est facile mais l'ARN et les plasmides ça n'est pas très claire, j'ai fait des recherches sur le net mais ça ne m'a pas vraiment aidé,si il y en a parmi vous qui aimerait bien m'expliquer comment se font ces 2 extractions, je leur en serais très TRES reconnaissante.  [...] Tu lyse tes cellules avec un réactif acide contenant de l'isothyocyanate de guanidium et du phénol. On fait une séparation par centrifugation avec du chloroforme ou du bromochloropropane. Tu obtiens une phase aqueuse (ARN), une interface et une phase organique.  [...]

phenol:chloroforme bizarre?

1- Ajouter phe.chl. isoamyl. à l'achantillon, mélanger, centrifuger. Prélever la phase aqueuse. Y ajouter du chl, centrifuger. Prélever la phase aqueuse. Précipiter l'ADN.  [...] 2- (le bizarre) Ajouter le phe, mélanger, centrifuger, et prelever la phase aqueuse. Ajouter chl.isoamyl. et précipiter (c'est la que ca coince, non).  [...]