• Forum - ARN, Extraction, Température

[Biologie Moléculaire] Conservation ARN

Après une panne de congélateur nous nous sommes posés la question de la température de conservation des ARN après extraction.  [...] La conservation d'ARN après extraction est possible à la température -20°C en une semaine en utilisant la RNA Later fournie par SIGMA.  [...]

[Biochimie] Extraction ARN

Je suis actuellement en train d'extraire des ARN viraux par méthode double extraction trizol-trizol LS et lorsque j'ai effectué la migration sur gel, je n'observe que très rarement les deux bandes caractéristiques à 18s et 28s. Normalement, je devrais observer deux belles bandes pour chaque échantillons puisqu'après quantification, j'ai pu voir que mes ARN étaient en concentration satisfaisante ( entre 0.5 et 1.8 µg/µL).  [...] Pour les solutions que j'utilise, il n'y a pas eu changement depuis que j'ai commencé les extractions. Ce sont des solutions neuves que j'utilise.  [...]

Extraction ADN phenol : température de centri

Je pratique des extractions d'ADN méthode phénol-chloroforme sur des produits alimentaires (bien gras et bien protéinés. C'est d'ailleurs pour cela que je ne prends pas des systèmes de kits et colonnes).  [...] Mais si quelqu'un pouvais m'éclairer sur le rôle de la température (par exemple sur la séparation d'avec les protéines, mais aussi l'extraction préférentielle de l'ADN vs ARN peut-être) ce serai super.  [...]

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs.   [...] J'aimerai demander si la conservation du sang total à -4 ou -20C affecterait les ARNs circulants et le rendement de l'extraction de ces derniers et si vous pouvez m'indiquer la période et la température optimale de stockage/conservation des prélèvements sanguins qui permet de préserver les ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN pour puce

Marrant ça (si j'ose dire). La plupart du temps, si on fait un gel controle d'extraction d'ARN, on verra une bande correspondant au 5S, mais aussi celle des 16S. Tu n'en as pas du tout.  [...] oui je fait mes extractions au trizol/chlo, je congele mon culot dans 10 mL de trizol, et le lendemain je lance mon extraction, pour l'instant on m'a proposé 2 pistes, 1-mon volume de trizol est tros important et il prend bcp de temps à decongeler (c'est vrai ca prend une 1/2 à temperature ambiante) et les ARN se dégrade pendant ce temps la (je pensais qu'ils étaient protégés dans le trizol, il parrait que non).  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

J'ai juste remarqué qu'en travaillant sur des échantillons congelés dans le TRIzol, j'avais un meilleur rendement que si je les traitais de suite après le prélèvement. Le fait de chauffer les échantillons pour favoriser la dissolution des sels avant extraction augmenterai mon extraction d'ARN.  [...] Juste pour vous dire que j'ai retenté une extraction d'ARN en faisant un lavage supplémentaire au chloroforme et mon rapport DO 260/230 est passé de 0,4 à 1 donc nette amélioration. J'ai dû cependant compenser la perte de rendement d'ARN en partant d'une quantité d'échantillon de 30% supérieure.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction des ARN par la méthode phénol/chloroforme

j'aurais une petite question au sujet de l'extraction des ARN totaux par la méthode au phénol chloroforme.  [...] Le seul rôle que je connais pour le chlorure de césium, c'est la centrifugation par gradient mais ce n'est pas une obligation pour une phénol / chlo.   [...]

[Biologie Moléculaire] extraction ARN

L'extraction phénol/chlorophorme ne permet pas de discriminer les ADN des ARN, quoiqu'il doit exister des protocoles suffisament précis pour optimiser le rendement en ARN.  [...] Le gradient de césium est bien plus précis et à mon avis on peut le faire après l'extraction phénol/chlorophorme, pour augmenter la pureté de sa préparation d'ARN.  [...]

[Biochimie] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme

Je viens de terminer pour la 6ème fois mon extraction d'ARN totaux à partir de cerveaux de souris par la méthode du Trizol puis Chloroforme et j'ai toujours le même problème. Au final, j'ai une très faible concentration d'ARN (de l'ordre de 200ng/µL).  [...] 200ng/µL, c'est une concentration qui peut être normale, ça n'est pas aberrant. En surnageant, tu récupères combien j'imagine que ça tourne autour des 500µL. Par contre, l'ajout de chloroforme se fait avant toute centrifugation puisqu'il participe à la formation des différentes phases.   [...]

[Biochimie] L'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN

après avoir cherché à plusieurs reprises sur internet, je n'ai pas réussi à trouver le rôle de l'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN.  [...] On me l'avait expliqué comme étant une étape de purification, toutes les molécules qui pouvaient se fixer sur l'acide nucléique ne pouvait le faire dans l'acétone. Sur le moment, j'avais pris ça pour argent comptant, mais maintenant, c'est vrai que c'est intéressant comme réflexion.   [...]