• Forum - ARN, Extraction, Température

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs.   [...] J'aimerai demander si la conservation du sang total à -4 ou -20C affecterait les ARNs circulants et le rendement de l'extraction de ces derniers et si vous pouvez m'indiquer la période et la température optimale de stockage/conservation des prélèvements sanguins qui permet de préserver les ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

En revanche, pour l'extraction d'ADN avec du phénol basique, c'est pas vraiment clair. Des sites comme http.//www.chups.jussieu.fr/polys/bi...Y.Chp.7.3.html disent que l'ARN et l'ADN sont en phase aqueuse (mais dans ce cas, qu'est ce qui élimine l'arn) mais sinon, implicitement, on pense que l'ARN est dans la phase organique (d'où la purification différentiel des acides nucléiques en fonction du pH).  [...] Pour l'extraction des ARNs, le P/C/IAA doit être à pH acide (~5), ce qui va dénaturer l'ADN pour se retrouver dans la phase organique et pour ne trouver que les ARN dans la phase aqueuse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

Sinon tu peux les repasser sur ta colonne d'extraction, par contre, tu risques de perdre au niveau rendement d'ARN alors tout dépend de ta concentration. Si tu précipites à l'isopropanol, tu risques également de perdre de l'ARN mais si il t'en reste suffisamment pour réaliser une RT PCR ça devrait aller.  [...] Le RNA later permet d'éviter la dégradation des arn lors de la décongélation. C'est utile si tu dois couper un certain poids pour l'extraction ou disséquer certaines parties et que ça prend un peu de temps sinon il faut couper sur de la carbo. J'ai fait des tests sur la qualité de l'ARN.  [...]

Purif d'ARN par le tryzol

Donc en gros ca te sert a te debarrasser des proteines et des lipides qui sont present lors de l'extraction des ARN. CA inactive aussi les RNAse, ce qui est bien pratique si tu ne veux pas recuperer a la fin des nucleotides libres.  [...] Donc en gros ca te sert a te debarrasser des proteines et des lipides qui sont present lors de l'extraction des ARN. CA inactive aussi les RNAse.  [...]

[Biochimie] A quoi ça sert?

la soude doit jouer le rôle de detergent pour détruire la membrane mais on doit un peu l'aider ( broyer ) on doit ajouter le tampon avec... apres ca doit etre la centrifugation différentielle pour séparer adn de arn et le tour est joué^^.  [...] dans mon cas la centrifugation intervient après le passage pas l'abaissement de ph puis de température. on récupere alors le surnagent, le culot contenant tout les detritus des levure frache si je ne me trompe pas. Et après es ce l'alcool à 95% qui permet une centrifugation ou juste parce que la centrifugation n'est qu'a 3000 tours.  [...]

Problèmes PCR

Essai éventuellement, pour t'assurer que le problème ne vient pas de la concentration, un marqueur de très petite taille qui se séparera plus facilement si tu as effectivement fait une erreur de concentration.   [...] C'est en effet ca. tu as utilisé la meme solution pour preparer ton gel et pour faire la migration qu'elle est la concentration en agarose de ton gel et enfin qu'elle est la taille attendue de tes PCR.   [...]

[Biologie Moléculaire] Quel Kit d'Extraction des RNA Totaux ?

Quel kit me conseilleriez-vous pour l'extraction des RNA totaux à partir des cellules lymphocytes pour l'étude d'expression des gènes.  [...] Ben moi je travaille pas du tout sur ce genre de matériel, mais j'utilise les kits d'extraction d'ARN de chez Qiagen surtout le micro car j'ai des petits échantillons, et le mini aussi et j'ai de très bon rendements.  [...]

une seul bande d'ARN visible voir deux...

Avec difficultés j'ai pu voir une deusieme bande mais très faible. Cela pourrait il venir de la concentration trop élevé de mon échantillon de départ (avant extraction de l'ARN).  [...] Le smear peut aussi provenir d'un probleme de gel et/ou de migration. A l'exception du smear qui se situe entre les deux bandes d'ARNr qui lui correspond aux ARNm. de quel espece extrais tu tes ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Conservation de tissus à -80°C

Dans les fait j'ai prélevé des tissus il y a 4 mois en vue d'une extraction simultanée protéines/ARN. J'ai eu à bosser sur autre chose entre temps et je commence à m'inquiéter un peu quand à l'intégrité de mes ARNs.  [...] Dipediou, c'est pas mal le RNA later (on en utilise d'ailleurs). Mais dans mon cas j'extraie les ARN et les protéines à partir des mêmes échantillons. Le RNA later ne permet pas d'extraire les protéines, donc je n'avais que le choix de la congélation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN bactéries lactiques

Je cherche actuellement à extraire les ARN totaux de cellules de bactéries lactiques dans le but de faire de la RT-PCR quantitative (mesure de l'expression d'un gène dans différentes conditions).  [...] On utilise ca pour extraire les ARN totaux de cerveaux de souris et de nos cultures cellulaires (=. et donc pourquoi pas bactéries..).  [...]