• Forum - ARN, Cellules, Bactéries

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN bactéries lactiques

Je cherche actuellement à extraire les ARN totaux de cellules de bactéries lactiques dans le but de faire de la RT-PCR quantitative (mesure de l'expression d'un gène dans différentes conditions).  [...] On utilise ca pour extraire les ARN totaux de cerveaux de souris et de nos cultures cellulaires (=. et donc pourquoi pas bactéries..).  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN Lignée cellulaire et Bactérie

J'aimerai profiter de votre savoir vis à vis de l'extraction d'ARNm dans le cas suivant. Je vais mettre en culture des bactéries (lactique) sur des cellules (HT-29) pendant quelque. En fin de cinétique j'aimerai pouvoir isoler l'ARN Bactérien ainsi que l'ARN eucaryotes.  [...] Je vais peut être dire une bétise ici, mais en remettant les cellules en suspension et en les filtrant sur une unité à mailles pas trop grosses (. 5-10µm), n'y a t-il pas moyen de séparer les bactéries des cellules afin d'extraire séparément les ARN des deux populations.  [...]

[Biotechnologie] Tampon de lyse

Ce tampon intervient directement après le lavage des cellules (bactéries ou cellules humaines), et à pour rôle de les détruire. Suivant ce que l'on veut faire ensuite (extraction protéines, ADN et/ou ARN), la composition du tampon varie, mais il contiendra généralement un détergeant afin de briser la membrane cellulaire et d'autre composants, également variables, mais aussi des sels et un pouvoir tampon au pH désirée.  [...] Bref, la composition du tampon de lyse est (très) variable suivant la manip' que l'on réalise, mais son rôle est généralement d'extraire notre produit en détruisant la cellule.  [...]

Plasmide et gène LacZ

Une fois les bactéries sélectionnées, il va falloir purifier les vecteurs, afin que l'ADN soit exempt de toute protéine, de tout ARN ou d'une quelconque contamination chimique. Puis, avant de commencer les expériences proprement dites, on transfecte les plasmides dans les cellules qui nous intéressent.  [...] Je pense qu'il y a une erreur parce que les bactéries non transformantes ont déjà été éliminées par l'action de l'antibiotique (Amp). Le système LacZ permet de différencier les bactéries (ou colonies) qui ont un plasmide avec l'insert (bactéries transformantes recombinantes) et celle qui ont le plasmide sans l'insert (bactéries transformantes non recombinantes) de part la couleur des colonies observées sur boîte de Pétri (si le milieu est préparé avec de l'IPTG et du XGal).  [...]

[Microbiologie] Les virus sont ils vivants?

Tu peux ainsi trouver des gens pensant les virus vivant et qui se débrouillent pour les brancher sur l'arbre du vivant avec les bactéries, archés et eucrayotes, ces virus formant un quatrième règne.  [...] Les mimivirus ont un génome énorme (plus gros que celui de certaines bactéries) et contiennent des gènes qui n'existent chez aucun autre virus mais chez des cellules vivantes, comme ceux codant pour la traduction de l'ARN en protéines, d'ailleurs certains pensent qu'ils constituent une 4ème branche du vivant.  [...]

Naissance d'une pandémie

En se multipliant en permanence dans ses organismes hôte, il arrive que le système comète une erreur et ne code pas le virus comme il le fait habituellement. Cela peut entraîner des tournants dans le virus, comme ici le passage a l'homme et la pandémie qui en a découlé.   [...] Après ce qui est difficile de comprendre, c'est la primo-infection. le processus par lequel le virus est devenu potentiellement virulent dans l'espèce humaine. Pour cela, il faut avoir en tete que beaucoup de cellules, de virus, de bactéries, d'organismes pluricellulaire s'échangent des informations génétique ( morceaux d'ADN, ARN, plasmides de conjugaison) par différentes méthodes qui tiennent de la biologie cellulaire (conjugaison, création de pont de partage, etc).  [...]

[Evolution] Épissage et Origine des Gènes de Développement

On peut supposé que l'ancêtre des cellules (comme LUCA), devait dupliquer son ADN de manière contigu (sans intron) ou presque, un peut comme le fait la plupart des bactéries actuelles (ARN polycistronique). L'origine des phénomènes d'auto-épissages des introns du groupe I (découvert en 1960), qui son associé sur l'activité auto-catalytique des Ribozymes des pré-ARNr, remonte peut-être à cette époque (et peut-être même au tout début de l'invention de la réplication cellulaire).  [...] Sauf deux choses, la première est que le phénomène d'épissage a évolué des bactéries (intron de groupe I et II) en passant par les arché et les cellules eucaryotes (groupe nucléaire). Il y a bien eu complixification du processus. Chez les bactéries, ils s'agit de ribozyme (ARNr) autocatlytique n'ayant pas besoins de complexe protéinique complexe.  [...]

Différence RT_PCR semi-quantitative et Q-PCR

On étudiait l'expression de recA chez les bactéries du sol. En théorie il aurait fallu utiliser l'ARN de recA dont on connaîtrait la concentration, mais comme on n'avait pas les bactéries en culture, nous avons utilisé le 16S des bactéries en question.  [...] Oui mon pb était de travailler sur le sol directement, je ne sais pas si les bactéries de cette espèce ont proliféré ou au contraire sont toutes mortes (j'ai pollué le sol).  [...]

Qui est venu en premier, Archéobactéries ou bactéries

On peut supposé que l'ancètre des cellules (LUCA), devait dupliquer son ADN de manière contigu (sans intron), un peut comme le fait les bactéries actuelles (polycistronique). On peut supposer également, que différent facteurs endogène ou exogène de mutation, ont agient directement sur les gènes de réplication, ou sur d'autres gènes qui étaient alors associés aux différents mécanismes de coordination, lors de la division et de la duplication de l'ADN.  [...] On peut supposé que l'ancêtre des cellules (LUCA), devait dupliquer son ADN de manière contigu (sans intron), un peut comme le fait les bactéries actuelles (ARN polycistronique). On peut supposer également, que différent facteurs endogène ou exogène de mutation, on agit directement sur les gènes de réplication, ou sur d'autres gènes qui étaient alors associés aux différents mécanismes de coordination, lors de la division et de la duplication de l'ADN, ou encore lors de processus de transfère horizontaux (comme chez les bactéries actuelle qui s'échange des morceaux d'ADN).  [...]

[Biologie Cellulaire] traduction des protéines

N'oublions pas que les cellules eucaryotes, leur ancètre était une endosymbiose d'une algue sur une bactérie (il me semble) et la bactérie a donné lieu à une mitochondrie (ce qui explique que nous avions de l'ADN mitochondriale).  [...] Donc nous avions une cellule ayant intégré une bactérie qui a fait une mitochondrie... mais il faut allez encore plus loin si je comprend bien. à comment se forme une cellule si il n'y a pas de protéine pour coder l'ARN Mais qui vous dit que les cellules ancestrales avaient besoin de l'ARN pour se développer C'est avec l'évolution qu'on a eu droit à tout ce matériel génétique.  [...]