• Forum - ARN, ADN, Concentration

[Biologie Moléculaire] Hybridation ADN/ARN

Pourquoi dit-on que, lors d'une hybridation ADN/ARN, si la concentration d'ARN est en excès, la vitesse d'hybridation est identique à celle d'une hybridation ADN/ADN alors que si la concentration d'ADN est en excès la vitesse est 5 fois moins que celle d'une hybridation entre ADN /ADN.  [...]

Solubilité d'ADN et d'ARN

J'ai une question concernant la solubilité d'ADN et d'ARN.. D'apres ce qu'on m'a dit l'adn est soluble dans l'eau et l'arn dans les solvants organiques comme l'alcool, phénol, chloroforme.. Mais ARN précipité en présence d'alcool mais non pas l'ADN.. Est ce possible Pouvez quelqu'un m'expliquer SVP.  [...] L'ADN et l'ARN ne SONT PAS SOLUBLES dans le phénol, le chloroforme, l'ethanol, l'acétone, l'isopropanol etc... C'est d'ailleurs bien pratique quand on veut les extraire et les purifier.  [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

La technique utilise l'absorbance de l'ARN, l'ADN et autre molécules à certaines longueurs d'onde ciblées... Que puis-je dire là-dessus Que pouvez-vous dire sur les ratios 260/280 et 260/230 Mon analyse me renseigne sur la concentration (en ARN), l'absorbance à 280 et 260 et les deux ratios.  [...] Il y a quand même un point qui reste obscur. En ce qui concerne l'utilisation de dUTP. Comme nous allons insérer l'ADN amplifié dans des plasmides afin de les introduire dans des bactéries, le fait d'utiliser des dUTP lors de la PCR pose-t-il un problème.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb migration ADNg sur gel

Lorsque j'extrais l'ADN à l'aide d'un kit (FastDNA kit), je dose (prenons l'exemple d'un tube, DO=0,127 d'où une concentration de 317,5µg/mL d'ADN). Je dépose sur un gel d'agarose 0,8% 5µL d'ADN + 2µL de bleu de charge.  [...] Pour moi tu as de l'ARN... En fait normalement tu as plus d'ARN que d'ADN dans ta cellule, donc il est normal que ta concentration soit plus elevee.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification d'ARN

Je suis en première année de thèse et après mon extraction d'ARN, j'ai une concentration de 8 ng/µL environ, dans un volume final de 11 µL (kit PicoPure de chez Arcturus, après microdissection). Je voudrais amplifier mes ARN car je dois étudier une dizaine de gènes en PCR temps réel, donc je n'aurai pas assez de matériel de départ (car il faut environ 50 ng d'ADN par puits...).  [...] Lequel vaut vraiment le coût Lequel est plus efficace qu'un autre.   [...]

[Biologie Moléculaire] Densité Optique a quoi sa sert en biologie ?

Les acides nucéiques absorbent la lumière à 260nm de longueur d'onde (UV). Mesurer l'absorbance à 260nm d'une solution d'ADN ou d'ARN te permet donc d'en déduire la concentration en l'un ou l'autre (loi de Beer-Lambert).  [...] Les mesures de DO sont aussi utilisées en biologie pour mesurer des concentrations de protéines, suivre des réactions enzymatiques ou encore des croissances bactériennes ou de levures en milieu liquide par exemple, le tout étant de savoir quelle longueur d'onde regarder pour tel ou tel contexte.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr quantitative eficacité de la pcr

Pour améliorer l'efficacité, il faut jouer sur la pureté et la quantité de tes ADN (car on amplifie des ADNc, pas les ARN en quantitatif), les temps et température des différentes étapes, la concentration en MgCl2 et en amorces.  [...] L'efficacité est assez rarement égale à 100%. Des tas de paramètres influent sur celui ci avec des relations complexes. Si tu connais ton efficacité, tu peux savoir combien d'ADNc on donné par la suite les amplicons, donc non ça me parait pas illogique. C'est le but de calculer cette efficacité, car pour ce qui est de la limite inférieure pour accepter la manip, c'est un peu flou.   [...]

[Biologie Moléculaire] Encore de la Q-PCR : quantification absolue maintenant

Ma question aujourd'hui est la suivante. je souhaiterais faire une quantification absolue de mon transcrits d'intérêt pour cela j'ai compris qu'on utilisait la gamme de dilution et les Ct mais j'arrive pas à voir comment on peut revenir à une quantification de transcrits puisque pour la gamme on ne connait que la quantité total d'ARN et pas celle du transcrit.  [...] Pour mes réalisations de Q-RT-PCR, ma gamme je la réalise avec un palsmide dont je connais la taille, la concentration... et bien sur dont je possède un couple de primers permettant d'amplifier un fragment de moins de 200pb de ce plasmide.  [...]

NanoDrop vs Qubit : quelles valeurs utiliser?

Dans le cadre de mon stage, je suis amené à réaliser une purification de l'ADN extrait de tissus FFPE. Suite à ma purification, j'ai réalisé une mesure de la concentration en ADN et de la teneur en contaminants au NanoDrop, ainsi qu'une mesure au Qubit afin de déterminer la concentration en ADNdb.  [...] J'ai bien compris que le NanoDrop surestime la concentration en ADN, puisque l'ARN absorbe à la même longueur d'onde, raison pour laquelle une analyse au Qubit est indispensable.  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

Je ne sais pas ce que tu veux faire avec ton ADN, mais si tu le quantifies A 260 il faut d'abord que tu degrades l'ARN et que tu repurifies l'ADN, sinon ta concentration va etre plus que fausse. Generalement dans les extractions old school il y a une etape de traitement a la RNase avant la precipitation.  [...] C'est inutile de diminuer encore la concentration en agarose dans le gel. Les fragments d'ADN génomique sont simplement trop gros pour être résolus dans un gel d'agarose en électrophorèse classique. Mais ce n'est pas ce que vous souhaitez faire, donc pas de souci à avoir.  [...]