• Forum - Anticorps, Protéine, ADN

Problème de biologie moléculaire

pour un EMSA, il faut une sonde ADN, donc savoir un minimum sur quoi peut s'accrocher votre protéine. Il faut mieux définir votre expérience. Protéine produite + ADN +/- extraits protéiques Vous avez un anticorps contre votre protéine pour faire un super shift et si l'interaction n'est pas directe Dans ce type d'expé, une interaction ne suffit pas pour dire que c'est un FT, de la même façon que l'absence d'interaction ne suffit pas pour dire que ce n'en est pas un.  [...] On aura un ladder pour l'ADN non mélangé à l'extrait nucléaire et un ladder avec une absence d'échelons au niveau de l'interaction protéine/ADN. L'énoncé ne précise pas l'utilisation d'anticorps pour provoquer ce super-shift. Mais c'est envisageable, la question est ouverte.  [...]

[Immunologie] immunoprécipitation

Donc avec 1 anticorps tu va piocher ta protéine. Ensuite tu purifie ton complexe anticorps/protéine et tu va regarder si tu as de l'ADN fixé. soit par PCR (si tu cherche une séquence spécifique) ds la CHIP ou soit directement par autoradiographie.  [...] l'immunoprecipitation te permet de purifier la protéine d'interet parmi toute celles synthetisées. Donc ton anticorps reconnait ta protéine, puis en generale tu utilises la proteine A couplée a des billes de sepharose. La proteine A a la propriete de se fixer aux anticorps, et la bille permet de culoter les complexes par centrifugation.  [...]

[Biologie Cellulaire] technique de retard sur gel et immunoprécipitation de chromatine

Le ChiP permet de déterminer la séquence d'ADN avec laquelle une protéine ou complexe protéique connu intéragit. C'est de l'IP sauf que là avec l'anticorps on fait tomber une protéine (d'ou la nécessité de connaitre son identité) qui intéragit avec, entre autre, des bouts de chromatine (préalablement digéré).  [...] Je peux te detailler le protocole mais ce que tu dois retenir c'est qu'a la fin avec la chip on obtient carrément le fragment d'adn sur lequel la protéine s'est fixé. donc non seulement il y a eu interaction mais on peut aller plus loin en t'informant précisément du site de liaison de la protéine a l'ADN.  [...]

Utilisation des fluorochromes Cyanine

Dites moi, je sais que les fluorochrome cyanine sont organiques Copment peut t on les utiliser pout un marquage en cellule Est ce qu'on peut faire un marquage spécifiques avec.   [...] Ils peuvent etre fonctionnalisés avec des groupements réactifs pour pouvoir les fixer sur une protéine par exemple. Le marquage ne sera pas spécifique, il ciblera par exemple toutes les lysine d'une protéine. Ils peuvent aussi etre couplés à des brins d'ADN ou des anticorps et sont donc ensuite révélés par fluorescence.  [...]

[Biologie Moléculaire] Utilisation de la résine Chelex pour reverse crosslink de l'adn

Je l'utilise dans le cadre d'immunoprécipitation de la chromatine, j'en ajoute 100 uL à 10% sur mes échantillons immunoprécipités pour détacher les complexes protéine/anticorps/billes de l'adn. Pour cela je mets le tout à 99°C pendant 10 minutes.  [...] Le Chelex est un chelateur puissant. Il va chelater les ions positifs ce qui va permettre d'eviter la degradation de l'ADN lors de l'etape 99 deg C / 10min. C'est cette etape de chauffage qui va dissocier les proteines de l'ADN. Chelater les ions va aussi inhiber les DNases.  [...]

Phage display et banque d'ADNc

Mais du coup, si une banque, c'est plein d'ADNc différents, on fait des protéines de fusion avec tous les ADNc différents et du coup le phage va exprimer en protéine tous ces ADNc Et après on fait la sélection.  [...] Le phage-display, c'est une méthode de criblage qui permet de selectionner un fragment d'ADN à partir des propriétés d'intéraction de la protéine qu'il code. Par exemple, dans ton cas, tu cherches un cDNA qui code pour un fragment peptidique reconnu par un anticorps spécifique.  [...]

[Biologie Moléculaire] structure des protéines

D'après le lien, l'immunoprécipitation permet donc d'identifier une protéine qui réagit avec l'anticorps qu'on a ajouté. Ici l'anticorps anti-proinsuline va réagir avec les protéines de proinsuline. On va donc par la suite pouvoir examiner la quantité ou les caractéristiques physiques de la protéine.  [...] Ici l'anticorps anti-proinsuline va réagir avec les protéines de proinsuline. On va donc par la suite pouvoir examiner la quantité ou les caractéristiques physiques de la protéine. On élimine ensuite les protéines qui ne sont pas liées à l'anticorps anti-proinsuline pour ne garder que les protéines de proinsuline.  [...]

Déplacement des proteines , acides aminé , enzyme ect ...

Bonjours a tous, je suis en terminal S, et on me parle de la structure des cellules, de la transcryption et la traduction de l'ADN, on me parle de proteine, d'anticorps, on me parles D'ARN messagé, on me parles de plein de chose qui restent somme toutes comprehensible relativement facilement.  [...] Je ne suis pas sur d'avoir compris ta phrase. En tout cas, l'ARNm ne synthétise rien du tout. Il est en fait synthétisé par une ARN polymérase, en copiant l'ADN. Une fois sorti du noyau, l'ARNm va rencontré (au hasard, cf la loi des grands nombres) un ribosome qui le traduira en proteine.  [...]

[Biochimie] etude de proteine de liaison à l'ADN

En gros, ta sonde libre va migrer en bas du gel, et en présence d'une interaction avec une protéine, le complexe ADN-protéine sera ralenti dans le gel puisque plus gros. il apparaitra une bande radioactive dite retardée.  [...] -tu ajoutes aun anticorps anti-X pour agglomérer la protéine X liée a des séquences.  [...]

[Immunologie] VIH difficultées à trouver un vaccin

Ceci vous justifie d'emblée que les anticorps produits à partir de la protéine native soient inéfficaces et l'intérêt d'en quelque sorte peler la protéine virale. On cherche à atteindre le noyau.  [...] C'est ce qui est décrit dans le document 2 partie 2. On a produit un anticorps contre la région constante en utilisant la protéine sans région hypervariable. Cet anticorps permet la vaccination en touchant toutes les protéines virales dans le court interval de temps où elles se découvrent.  [...]