• Forum - Anticorps, étape, Blocage

[Biologie Moléculaire] Technique du Western Blot

Plus précisément il faut saturer les sites de fixation non spécifiques des anticorps, pour éviter d'avoir trop de bruit de fond et plus important, d'avoir du signal non spécifique. C'est globalement le même principe que pour les étapes de blocage en immunohisto.  [...] Complément à mon message d'au dessus, je me rends compte qu'il est plus qu'incomplet. la membrane de nitrocellulose sur laquelle tu as transféré tes protéines est faite pour accrocher toutes les protéines de manière non spécifique, donc si tu incube tes anticorps sans avoir fait au préalable d'étape de blocage ils vont se fixer partout.  [...]

[Immunologie] Elisa: Help pour blocage du non spé dosage d'anticorps

Je suis en train de mettre au point un dosage d'anticorps par technique elisa. J'utilise des peptides (trentaine d'AA) qui sont biotinylés et coatés sur des plaques streptavidine (Pierce) qui sont prébloquées au superblock. Le coating se fait par incubation d'1h des peptides biotinylés (dilués en PBS) dans les puits des plaques revêtus de streptavidine.  [...] Je pense que le superblock ne bloque pas suffisamment la fixation des anticorps non spécifiques du sérum (je n'ai pas d'accrochage du conjugués, je l'ai vérifié). J'ai essayé d'ajouter une étape de bloquage en PBS + BSA1% 1h +37°C après le coating des peptides biotinylés mais cela a complètement inhibé la signal spécifique aussi.  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunocytolocalisation - Anticorps primaire 3-4h ?

Je dois faire des immunolocalisations sur cultures cellulaires. Mon anticorps primaires fonctionnent vraiment très bien (anti-FLAG M2).  [...] En tout cas, je vous confirme bien que cela fonctionne. Comme je n'avais pas encore lu les dernières réponses, j'ai fait 30 min de fixation, blocage au lait 10% pdt 1h, 3h d'anticorps primaire et 1h d'anticorps secondaire.  [...]

Informations sur ce fameux test vih - Page 3

Trois étapes simple, la lyse des cellules (et dénaturation des protéines en même temps). On dépose le tout sur une membrane où se trouve des protéines recombinantes virales ainsi qu'un contrôle. Lors de cette étape, les anticorps non spécifique du patient vont se fixer sur le contrôle, et les anticorps anti VIH (si il y en a) vont se fixer sur les protéines virales de la membrane.  [...] Encore une fois, d'accord avec Myoper. Les anticorps à eut seul ne serve pas à grand chose. Ce n'est qu'une étape dans la destruction du pathogène (et cela arrange bien le VIH). Et comme le dit myoper, ce VIH a tendance à se calmer après la tempête lors de la primo-infection.  [...]

[Biochimie] Devoir de biologie pour demain

Le blocage de n'importe quelle étape entraîne l'absence de pigment brun, et donc l'apparition du phénotype alternatif yeux rouges vifs [rv].  [...] il va falloir y mettre un peu plus de bonne volonté, car il n'est pas question qu'on te fasse ton travail. Alors donne nous tes resultats, car il est tres surprenant que tu puisses démontrer qu'il y a deux genes, et que tu ne saches pas démontrer s'ils sont liés.   [...]

[Immunologie] Protocole ELISA

La détection des anticorps se fait par test ELISA. Le sang des poissons est récupéré par la veine caudale et mis à coaguler une nuit à 4°C. Le sérum est ensuite récupéré et dilué. Les antigènes proviennent des parasites. L'anticorps de détection est une immunoglobuline anti-loup obtenue en injectant des antigènes de loup dans un lapin.  [...] pour affiner votre protocole, pensez à réaliser une étape de blocage après la fixation de votre antigène au fond du puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot/azide?

pendant l'étape de blocage de Western Blot on utilise le lait (écremé) pour éviter les bruit du fond mais aussi de l'azide à 0.01%.  [...] Pour ce dernier (azide ou azoture) je pense que c'est pour la conservation Et pourquoi on ne l'utilise pas pendant l'étape où on va ajouter le deuxième anticorps couplé à HRP.  [...]

[Biochimie] Western blot, question "pratique"

j'ai un soucis depuis peu. Je fais depuis longtemps des WB et j'avais l'habitude d'incuber mes anticorps sur mes membranes en utilisant les boites de cones vides (c'est propre et jetable). Depuis quelques temps, un changement de politique de tri m'empeche de continuer à faire comme ça, du coup je suis à la recherche d'astuces pratiques et pas chères (je fais une dizaine de blots par semaine) pour que je puisse incuber mes anticorps overnight.  [...] perso j'utilise également des boites plastiques dans lesquelles différents anticorps ont été incubés mais je les lave avant le blocage avec du produit à vaiselle et je rince (très très) abondamment. bon courage.  [...]

vaccin

Si le contact est fait, alors le Lymphocyte B crée des anticorps, petites protéines qui reconnaissent spécifiquement les antigènes des intrus et les empêche de faire leur travail contre nous (blocage de tous les sites du virus, précipitation, agglutination, etc...).  [...] Ensuite une fois l'ennemi détruit par immunité humorale (anticorps), le lymphocyte B garde en mémoire la trace de cet intrus. Et ensuite l'étape de recombinaison n'est plus nécessaire et c'est plus rapide de faire des anticorps.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot

J'ai une question qui va sans doute paraître naïve mais tant pis alors la voilà. Dans un Western blot par exemple, il y a une étape après l'électrophorèse dite de blocage qui consiste à saturer (souvent avec de la caséine ou du BSA) les sites non spécifiques, ce que je comprends bien dans le principe.  [...] Elle se fixe aussi sur les sites spécifiques, mais l'anticorps a une affinité plus grand pour ces sites et déplace donc la protéine aspécifique pour s'y fixer. Ce qui n'est pas (moins) le cas avec le sites aspécifiques.  [...]