• Forum - Anticorps, Couple, Enzyme

[Biologie Moléculaire] Immunohistochimie/ Immunomarquage

De ce que je me rappelle les deux termes évoquent la même chose. Et le test ELISA en est un bel exemple. On peut mettre en évidence la présence d'une protéines, Ag, etc... d'intérêt à l'aide d'anticorps primaire, secondaire couplé à une enzyme dans le cas de l'ELISA.  [...] Pose de l'anticorps primaire,rincage, anticorps secondaire couplé à une enzyme, rincage. Ensuite, tu ajoutes le substrat et atteint que la réaction se fasse. Si ta molécule d'intérêt était présente et que tous les autres Ac ont réagi alors l'enzyme couplé au secondaire réagit avec le subtrat et ta solution devient jaune.  [...]

[Biochimie] marquage à la digoxigenine

La digoxigénine est incorporée dans la séquence d'ADN au cours de la PCR, sous la forme de dUTP-digoxigénine le plus souvent. Et on utilise ensuite un anticorps qui reconnaît spécifiquement la digoxigénine. Je n'ai jamais entendu parler d'une enzyme spécifique de cette molécule perso.  [...] Merci Zellus de m'avoir corriger, je voulais dire un anticorps couplé à une enzyme et cette enzyme va engendrer une réaction colorée qui nous permettra de visualiser les échantillons positifs.  [...]

Lire un test HIV

Je ne parle pas des protéines du virus. Mais en toute rigueur, lorsqu'on est séronégatif, on ne doit pas avoir créé d'anticorps contre lui. Or le test Elisa donne un index de O,32, ce qui signifie qu'il y a eu réaction des protéines contenues dans ce test avec des protéines contenus dans le sang, la réaction étant semblable à celle apparaissant chez la personne séropositive entre les protéines du test et les anticorps au vih (immunoprécipitation par exemple, avec lecture de la turbidité par détermination de la densité optique).  [...] En effet dans le cas d'une recherche d'antigene, tu utilises un anticorps primaire qui le reconnait, puis tu utilises un anticorps secondaire, qui reconnait ton anticorps primaire. L'anticorps secondaire etant couple a une enzyme qui va reagir avec son substrat et te donner la coloration mesuree par la densite optique.  [...]

[Immunologie] Elisa

ELISA ou Elisa est l'acronyme d'un examen de laboratoire appelé en anglais. Enzyme-linked immunosorbent assay = essai d'un immunosorbent lié aux enzymes. Synonyme. EIA = enzyme immuno assay. C'est une technique biochimique utilisée en immunologie pour détecter la présence d'un anticorps ou d'un antigène dans un échantillon.  [...] La technique utilise deux anticorps, l'un d'entre eux étant spécifique à l'antigène et l'autre étant couplé à une enzyme. Le second antigène confère à l'essai son nom de enzyme-linked = lié aux enzymes, et provoquera chez un substrat chromogène ou fluorogène la production d'un signal.  [...]

dosage immunologique

Dans le premier cas, tu coates tes puits avec un anticorps dirigés contre la substance à détecter, par exemple anti IL2. Ensuite tu incubes ton échantillon (sérum, surnageant de culture,...) et tu révèles avec un deuxième anticorps couplés à une enzyme. Cette enzyme ve dégrader son substrat qui a été choisi pour changer de couleur lorsqu'il est hydrolysé.  [...] Je permets donc juste une dernière question, plus pratique. Il y a donc au moins deux étapes avant la révelation (1/ incubation de l'échantillon biologique à tester et 2/ dépôt du 2ème anticorps couplé à l'enzyme). mais en pratique lorsqu'une femme fait un test de grossesse par exemple, elle ne dépose que de l'urine sur le test et pas d'anticorps secondaire couplés avec une enzyme, donc comment se fait la détection pour ce genre de test fait à la maison.  [...]

[Microbiologie] Elisa

Salut, il existe plusieurs types de test par ELISA,soit plus précis...Sinon,ça marche sur le principe d'anticorps ou antigènes marqués.  [...] Le test ELISA classique consiste à déposer des anticorps dans le fond d'un puits, tu ajoutes l'antigène (qui est complémentaire de ton anticorps préalablement fixé), tu laves (pour éliminer les antigènes non fixés), ensuite tu ajoutes un second anticorps couplé à une enzyme et complémentaire à ton antigène, qui en présence d'un substrat va colorer ton milieu, après il suffit de mesurer l'intensité lumineuse émise.  [...]

[Immunologie] Protocole ELISA

De la même façon, l'anticorps secondaire est une immunoglobine anti-lapin obtenue en injectant des antigènes de lapin dans une chèvre (anticorps disponibles dans le commerce). Cet anticorps secondaire est couplé à une enzyme peroxydas e obtenue chez le radis ou le raifort. test elisa.png.  [...] NB. je ne suis pas expert dans le domaine mais pourquoi avoir choisi trois anticorps Ne pouvait-on pas couplé la peroxydase à l'anticorps anti-loup directement.  [...]

Immunodetection

Sinon n'importe quel type de microscope peut être utilisé pour de l'immunodétection au sens large du terme. Tout dépend de la méthode que tu utilises/de ce que tu veux observer.   [...] on peut faire de l'immunodétection avec un microscope fluorescent, optique ou electronique (en ordre décroissant d'utilisation) selon qu'on visualise un anticorps couplé a une substance fluorescente, à une enzyme type HRP, ou a des billes métalliques, respectivement.  [...]

[Biologie Cellulaire] Anticorp anti-espece et Western Blot

L'anticorps secondaire (que tu as nommé AC2) est celui qui va te permettre de mettre en évidence la réaction AC1-protéine d'intérêt. cet anticorps (AC2) sera couplé à une molécule qui permettra la révélation (en général l'enzyme HRP, peroxydase de raifort).  [...] Cet anticorps sera lui dirigé contre l'anticorps primaire, c'est un Ac anti AC1. Par conséquent dans l'exemple, si tu as utilisé un anticorps de souris comme AC1, l'AC2 sera un anticrops anti anti-corps de souris, produit par exemple chez le lapin. le couple AC1-AC2 n'est pas produit dans la même espèce animale, puisque l'AC2 est censé reconnaire l'AC1 comme un antigène.  [...]

[Biologie Moléculaire] Surface biotinylation

La biotine aussi connue sous le nom de vitamine H ou B8 est un coenzyme qui participe au métabolisme des acides gras, des glucides et des acides aminés et à la synthèse des vitamines B9 et B12.  [...] Le seul moment ou on peut utiliser la biotine lors d'un western est au moment de l'hybridation avec les anticorps. On incube les membranes avec un anticorps secondaire couplé à la biotine. La biotine ayant une affinité très forte avec la streptavidine ou l'avidité, on peut révéler le western avec une enzyme couplée à la streptavidine.  [...]