• Forum - Anticorps, Bande, Réaction

[Biologie Cellulaire] Besoin d'aide dans l'identification d'une molécule !

salut, j'ai rien compris dans les données némurique, je pense que la bande représente l'éxés d'anticorps primaire sur lequel est fixé l'anticops secondaire( apparence de la bande),il y'a saturation des récepteurs d'anticorps primaire où se fixe le secondiare,faire une autre manip avec les deux anticorps seulement et l'emplacement de la bande de leur réaction peut confirmer ou.. mon hypothése.  [...] salut, mnt que je sais la signification des unités KDA, mon hypothése doit toujour être vérifier, possible qu'il n'y pas une simple réaction biochimique de liaison (anti-corps primaire et secondaire) mais aussi une autre réaction biochimique de décomposition des molécules réactivent en même temps ce qui réduit la masse moléculaire à 50 kDA, en plus les récepteurs + anticorps primaire +anticops secondaire(100kda) pésent 170 kda me parrait peu.  [...]

[Immunologie] Interaction Anticorps/Antigène

Bonsoir je voudrais savoir pourquoi un anticorps et un antigène ayant une très grande affinité sur un test ELISA ne réagissent pas en immunodiffusion ou en en Western-blot.  [...] Alors qu'un WB, on a une plus grande spécificité car on a une bande spécifique de chaque antigène, mais la lecture se fait à l'oeil nu, donc même si les anticorps se fixent aux Ag, s'ils sont en faible quantité, en lisant à l'oeil nu on peut tout à fait passer à côté d'une réaction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot profil actine

Généralement, il n'y a pas grand chose à faire à part changer d'anticorps. As-tu déjà eu une seule bande d'actine avec ce même anticorps J'ai déjà rencontré ce problème avec un anticorps anti-actine, les bandes détectées juste en-dessous peuvent être des isoformes d'actine mais ça reste une hypothèse.  [...] Pour éviter les biais, le mieux est donc de prendre un anticorps plus spécifique qui ne détectera qu'une bande d'actine. C'est ce que j'ai fais et je n'ai plus de problème depuis des lustres.  [...]

[Biochimie] Denaturation des IgG avant western-blot

Je dois étudier une protéine produite par une souris, mais le seul anticorps disponible a été fait chez la souris, l'autre problème est que ma protéine fait environ 150 kd, et que je vois une jolie bande d'IgG a cette taille.  [...] Es-tu obligé de dénaturer à la chaleur Du SDS ou de l'urée 8M ne seraient-ils pas suffisants Les anticorps étant multimériques et attachés par des ponts disulfures, n'utilise pas d'agents réducteur sinon tu obtiendra plusieurs bandes bien différentes.  [...]

dosage immunologique

Dans le cas des tests de grossesse, les anticorps anti HCG sont couplés à une molécule colorée. Ces anticorps sont libres et sont présents dans la tige du test qui sera mise en contact avec l'urine. Dans ce cas, le liquide remonte par capillarité, entrainant les anticorps.  [...] A un certain niveau du test, il y a d'autres anticorps antiHCG (dirigés contre un autre épitope). Ces anticorps sont eux fixés sur une matrice. Ils vont réagir avec le deuxième épitope de la HCG et cette interaction est plus forte que la force de capillarité.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot et interférences?

Les sérums peuvent-il contenir des anticorps anti-BSA Est-ce vraiment possible Ou la bande que j'observe aux alentours des 70kD est quand même bien la sous-unité de la PDH.  [...] Peut etre que, tout en augmentant la résolution, tu pourrais tester en parrallèle un anticorps anti bsa pour etre sur que la bande que tu observes comigre bien avec ce que tu penses etre de la bsa. Je vais peut etre dire des bétises mais si tu utilises des sérums bovins (à moins que ce soit autre chose) tu auras donc des anticorps bovins anti bsa mais si ton anticorps primaire anti PDH n'est pas d'origine bovine (en général, c'est souris, lapin ou chévre), tu réveleras avec un anticorps secondaire (souris, lapin ou chévre) qui ne reconnaitra pas les anticorps anti bsa d'origine bovine. A moins que tu révele ta protéine différemment.  [...]

[Immunologie] immunoprécipitation

Si tu a apparition d'une bande sur ton Western avec l'anticorps anti 2eme protéine c'est qu'elle est présente en meme temps que protéine 1, si pas de bande c'est que non.  [...] l'immunoprecipitation te permet de purifier la protéine d'interet parmi toute celles synthetisées. Donc ton anticorps reconnait ta protéine, puis en generale tu utilises la proteine A couplée a des billes de sepharose. La proteine A a la propriete de se fixer aux anticorps, et la bille permet de culoter les complexes par centrifugation.  [...]

Help bandes aspecifiques reconnues par l'anti-cofiline

Help bandes aspecifiques reconnues par l'anti-cofiline.  [...] Voici mon problème. j'ai fait un western en utilisant l'anti-cofiline de chez cytoskeleton. J'observe bien la bande prédite dans les 20 kDa mais également une autre bande à environ 30-32 kDa. Quelqu'un sait-il à quoi cette bande pourrait correspondre En faisant quelques recherches sur le net, je vois que cela est aussi présent pour des anticorps vendus par d'autres firmes.  [...]

[Biochimie] etude de proteine de liaison à l'ADN

En gros, ta sonde libre va migrer en bas du gel, et en présence d'une interaction avec une protéine, le complexe ADN-protéine sera ralenti dans le gel puisque plus gros. il apparaitra une bande radioactive dite retardée.  [...] Selon les cas, tu peux vérifier quelle protéine interagit avec ton ADN en ajoutant a ton mix ADN+ protéines un anticorps dirigé contre ta protéine d'intéret. Dans ce cas deux solutions.  [...]

[Biologie Cellulaire] Co-Immunoprécipitation

6. Tu déposes sur gel et fait un Western Blot. Tu révèles avec un anticorps dirigé contre ta protéine B (alors que l'IP a été faite avec un anticorps contre la protéine A). Si tu as une bande au poids attendu pour B, cela signifie que tu as co immunoprécipité B avec A.  [...] Tu peux aussi immunoprécipiter avec un anticorps anti C (autre protéine connu pour ne pas interagir avec A ni B), et vérifier la présence de A ou B. Si tu détectes A ou B, cela signifie que tu as une fixation aspecifique de ta protéine sur les billes, que tes lavages n'étaient pas bons.  [...]