• Forum - Anticorps, Antigène, Western

Le système immunitaire

Nombres de techniques moléculaires maintenant avancées permettent de mettre en évident ces structures que tu appelles Anticorps Antigène etc.  [...] Le principe de la reconnaissance d'un antigène par un anticorps (en dehors de la physiopathologie) a été adapté et est utilisé comme outil technique par des millions de personnes chaque jour (dont moi) en recherche fondamentale ou clinique, pour réaliser de nombreuses expériences dont les fameux tests ELISA, Western Blot, immunoprecipitation et des dizaines d'autres.  [...]

[Immunologie] Interaction Anticorps/Antigène

Bonsoir je voudrais savoir pourquoi un anticorps et un antigène ayant une très grande affinité sur un test ELISA ne réagissent pas en immunodiffusion ou en en Western-blot.  [...] Alors qu'un WB, on a une plus grande spécificité car on a une bande spécifique de chaque antigène, mais la lecture se fait à l'oeil nu, donc même si les anticorps se fixent aux Ag, s'ils sont en faible quantité, en lisant à l'oeil nu on peut tout à fait passer à côté d'une réaction.  [...]

Immunohisto

Par ailleurs, l'anticorps peut reconnaitre des structures +/- natives ou bien denaturees. En immunohistochimie, l'antigene est (normalement, et si l'on considere la fixation comme preservatrice) en conformation native. les proteines gardent une structure secondaire, tertiaire ou meme quaternaire.  [...] Cependant. 1) en western, si l'anticorps est suppose reconnaitre un site qui peut etre modifie (phosphoryle, clive, episse, acetyle, palmytoyle...), il se peut que en fonction du tissu, la proteine soit ou non modifiee a cet endroit et donc ne lie plus aussi bien l'anticorps en western-blot.  [...]

[Biochimie] lyse cellulaire

je vais faire un western blot avec le sérum contenant les anticorps après infection d'un animal et par là je détermine les protéines immunogènes.  [...] Si vous faites un western blot avec un pool d'anticorps dirigés contre des antigènes du parasite, votre expérience sera spécifique de ces antigènes là. Les antigènes de l'hôte ne seront pas détectés vu que les anticorps proviennent de l'hôte en question (sinon ce seraient des anticorps auto-immuns).  [...]

Différence de fixation des cellules

Avec le methanol, la fixation s'effectue par deshydradation (denaturation des proteines) alors qu'avec les aldehydes (formaldehyde, glutaraldehyde) on conserve la structure 3D de la proteine (fixation par pontage). Donc effectivement, si tu utilises un anticorps conformationnel, la detection de ton antigene sera impossible apres une fixation en methanol.  [...] Non là je ne suis pas tout à fait d'accord. La plupart des anticorps sont destinés et testé pour un usage particulier. Rien que chez Cell Signaling pour ne pas la citer, les anticorps sont validés pour une ou plusieurs manipe définit (western, If, immunohistochimie, immunoprécipitation,  [...]

[Divers] microbiologie, immunologie, biochimie.....

Je ne connais pas spécialement de méthode d'extraction d'antigènes bactériens, mais ce que je connais c'est la propriété des antigènes. on peut leur trouver des anticorps spécifiques.  [...] Les antigènes sont simples à purifier, tant qu'on a à disposition le matériel nécessaire. En effet ils sont spécifiquement couplables à des anticorps. Donc on entend chromatographie d'affinité. On entend western blot si ce sont des protéines. On entend tout ce qui fait intervenir des réactions entre ligands.  [...]

Problème RT-PCR sur cDNA

Une autre possibilité. un Western Blot avec un anticorps specifique du peptide que donnerait cet intron s'il était traduit. Si le Western est positif alors tu auras prouvé que cet intron est inclus et tu pourrais même estimer la quantité avec un anticorps contrôle spécifique d'une autre partie de ta protéine.  [...] Si tu retrouves toujours les mêmes cicatrices (=intron mal épissé), c'est bien de l'épissage alternatif, avec des sites donneurs et/ou accepteurs alternatifs qui enlèvent une partie de l'intron habituel. Il y a des logiciels qui prédisent la force des sites d'épissage selon le contexte des base comme NetGene2 http.//www.cbs.dtu.dk/services/NetGene2/.   [...]

[Biologie Moléculaire] Anticorps GLUT2 pour Western Blot

J'aimerais avoir votre avis sur un petit problème que je rencontre actuellement au laboratoire. Voila je fais des Western Blot depuis un bon moment mais impossible de trouver un anticorps GLUT2 assez potable. En effet beaucoup me donne des bandes non spécifiques.  [...] J'aimerais donc savoir si vous connaissez des anticorps qui peuvent donner un signal assez correct. Je travail sur du foie (pour petite information). Merci.  [...]

[Biochimie] Etude de la phosphorylation d'une protéine

En fait je pensais aussi faire un western sur ton gel avec des anticorps anti-Ser/Thr/Tyr phorsphorylées et anti- ta-protéine. Je n'ai jamais fait de 2D mais je sais que ça se fait. Et puis pour les grosses protéines ont peut aussi faire des gels d'agarose, au moins pour la première dimension.  [...] Ce n'est pas si onéreux, en tout cas moins que tes colonnes. S'ils possèdent un spectromètre adapté ils pourront identifier n'importe quelle modification post-traductionnelle. En tout cas je ne te conseil pas les anticorps anti sérine ou tyrosine phosphorylés.  [...]

[Biologie Cellulaire] Qui à déjà utilisé le système SNAP i.d. de Millipore pour ses Western Blot?

C'est seulement lorsqu'un anticorps est déjà un peu limite en western normal que là le SNAPid risque de donner un résultat encore plus moche en terme de spécificité. Mais c'est rare.  [...] Nous l'avions demandé en prêt avant de l'acheter. Je vous suggère de faire pareil. Ainsi, cela vous permettra de tester vos anticorps et d'être surs que cela fonctionne dans vos mains.  [...]