• Forum - Amplification, Fragments, ADN, ARN, Protéines

[Génétique] Effet de dosage génique

L'amplification des gènes est un cas particulier de dosage génique car il correspond à un accroissement du nombre de gènes en réponse à un signal. L'amplification de fragments d'ADN portant des gènes particuliers est utilisée comme moyen de production massive d'ARN et de protéines.  [...] L'amplification des gènes est un cas particulier de dosage génique car il correspond à un accroissement du nombre de gènes en réponse à un signal.  [...]

[Génétique] Sequençage d'ADN

Sur l'image g, tu ne vois que la moitié des fragments (ceux qui ont leur 3' en vert), les primers ajoutés ne s'hybrident qu'à ces fragments de ssDNA. Chaque paquet possède des fragments qui sont complémentaires, puisqu'ils sont le résultat d'une amplification à partir d'un fragment d'ADN seulement.  [...] La deuxième phase, est la phase qui permet de séquencer les fragments. Certes l'ADN y est aussi amplifié, mais c'est n'est pas le but. Au début de cette phase, on ajoute seulement un type de primers, des dNTP et la polymérase. Les dNTP ont tous un fluorofore sur leur sucre, qui empêche l'ajout d'un autre nucléotide lors de la réplication.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN contaminé par de l'ADNgénomique

le seul problème est que je n'ai plus assez d'ARN non plus... je vais maintenant tenter de faire agir la DNase après purification des ARNs, en milieu liquide et non dans la colonne, je vous donne les résultats demain.  [...] en traitant mon ARN en milieu liquide direct après purification puis en faisant un Clean up derrière je n'ai plus de contaminantion et même si j'ai une perte d'ARN elle n'est pas énorme (1 semaine pour résoudre ce problème...).  [...]

ARN en PCR

Afin d'effectuer une PCR sur un extraits d'ARN (et observer une amplification) il faut d'abord effectuer une Reverse-Transcription qui permet d'obtenir de l'ADNc (ADN complémentaire) à partir du brin d'ARN.  [...] Ça n'a absolument rien à voir avec la structure simple brin ou double brin. l'ARN peut tout à fait exister sous forme double-brin. La Taq Polymérase amplifie l'ADN parce parce qu'elle se lie à l'ADN pour produire de l'ADN. On parle d'ADN polymérase ADN dépendante.  [...]

[Biochimie] Lac IQ et Tac promoteur

J'ai compris l'histoire du promoteur, de l'expression dans une bactérie,mais là je te parle du test NASBA,test de détection des ARN rétroviraux qui utilise la T7pol comme aplificatuer.Mais comment se fait-il qu'une T7pol de bactériophage puisse amplifier des ARN de virus comme HIV.  [...] Pour le système NASBA, l'avantage en synthétisant de l'ADN à partir d'ARN puis de l'ARN à partir de l'ADN est qu'on a une boucle qui permet ainsi l'amplification du matériel initial. Je ne me suis pas penché sur la technique en profondeur et il se peut qu'il y ait d'autres avantages de l'utilisation de la T7 RNA polymérase.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification d'ARN

La conversion en ADN par transcription inverse, amplification de l'ADN par PCR puis la transcription en ARN est-elle la démarche la plus pratique.  [...] comme le dit gorben, tu n'as pas d'autre solution. d'autant que la transcription in vitro necessitera l'obtention d'une maniere ou d'une autre une copie ADN a transcrire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

Ton prof voulait probablement dire qu'a l'issue d'une reverse-transcription (RT) suivie de PCR. si le résultat est négatif, a priori c'est qu'il n'y a pas d'ARN et il est positif que s'il y en a (sous réserve d'un contrôle ou l'on amplifie l'échantillon sans passer par RT, pour vérifier l'absence d'ADN dans la préparation avant la RT).  [...] Malheureusement les enzymes utilisées en PCR ne sont pas capables de prendre comme matrice un brin d'ARN. La solution est donc d'utiliser une enzyme qui synthétise un brin d'ADN complémentaire de ton ARN, ce brin pouvant ensuite etre utilisé comme matrice pour l'amplification.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Cela permet notamment de presque totalement inhiber la polymérase. Même a 25°, certaines polymérases notamment les non hot start peuvent avoir une activité de polymérisation qui peut favoriser l'apparition de produits non spécifiques.   [...] pour mes PCR en temps réel et quand je doit travailler avec de l'ARN,je met l'ARN sur glace car contrairement à l'ADN,il se dégrade à cause de la chaleur,donc si tu ne travail pas sur glace,tu ne devrais pas trouver de bons résultats mais attention l'ADN doit être amplifié dans le thermocycleur et il supporte la chaleur donc pour amplification d'ADN pas besoin de travailler sur glace,j'espère avoir bien répondu à ta question et que ceci pourra t'aider.  [...]

création de bactéries artificielles

Moi j'ai simplement entendu parler de la fabrication artificielle d'un virus par une nouvelle technique d'amplification et de lagation des fragments d'ADN. Une fois synthétisé ce génome virale etait injecté dans une cellule et il a permi la synthèse de nouveaux virions. C'etait aussi craig venter.  [...] il ne reste plus qu'à transformer (electroporation, choc thermique) la moitié qui n'a pas reçu le matériel génétique parent avec un chromosome artificiel mais complet (facilement synthétisable grace aux méthodes de PCR et de clonage moléculaire...). Si cet hybride se porte bien, au bout d'un certain nombre de divisions il aura diluer les composants du parents (protéines, ARN, métabolites, lipides de la membrane) et sera donc complètement neuf et articiel.  [...]

[Biologie Moléculaire] qPCR

Si on veut amplifier d'une part de l'ADN et d'autre part de l'ARN, serait-il envisageable de n'utiliser qu'une seule plaque PCR. de faire l'étape de rétro transcription sur la plaque entière (avec la rétro-transcriptase seulement dans les puits avec ARN) et ensuite faire l'étape d'amplification sur la totalité de la plaque.  [...] pour que se soit spécifique d'un organisme, il faut utiliser des amorces qui reconnaissent spécifiquement la protéine X qui t'intéresse dans l'organisme en question. La seule raison qui pourrait faire que ce ne soit pas spécifique serait que cette protéine se retrouve dans d'autres, du fait de sa conservation au cours de l'évolution.  [...]