• Forum - Amplification, Fragment, ADN

PCR : Réaction en Chaîne par Polymérase

Il y a de multiples variantes de PCR pour détecter une mutation. Par exemple, tu prends un couple d'amorce dans lequel une des deux amorces a son extrémité 3' qui s'hybride sur un nucléotide muté ou non. Si tu choisi une amorce spécifique du nucléotide non muté, la présence d'une mutation va empêcher l'hybridation de l'extrémité 3' de l'amorce, et la polymérase ne pourra pas amplifier le fragment.  [...] Un seul fragment d'ADN n'est absolument pas détectable si on effectue une visualisation sur gel après coloration avec du syBRgreen. Il y a nécessité d'avoir une forte amplification du fragment pour qu'il soit bien détectable.  [...]

[Génétique] Plasmide

comment purifier le fragment linéaire apres amplification du plasmide pBR 322 dans escherichia coli et extraction de l'adn plasmidique.  [...] Lors de ta PCR t'as surement utilisé des amorces contenant des sites de restriction que tu dois utiliser donc voila tu commence par faire une digestion avec ces enzymes, tu dépose ensuite sur gel pour récuperer ton fragment, et ensuite tu purifie alors il existe plusieurs techniques de purfi pour des produits PCR recuperes à partir de gel.  [...]

[Génétique] Choix amorces amplification portion ADN

- Si j 'ai un fragment d'ADN à amplifier et que j ai un codon début et un codon stop au milieu du fragment, est-ce que je m'en fiche dans le cadre d'une amplification d'un fragment d'ADN En gros, quand on me demande d amplifier un fragment, c est un fragment, sinon on m aurait demandé d'amplifier le gène.  [...] - Si je n'ai pas de codon ATG ou stop dans mon fragment, dois-je le rajouter dans ma séquence d'amorce ( je crois que je fais une confusion entre l amplification et la traduction du gène).  [...]

[Biochimie] séqunçage technologie 454

J'ai une question concernant la technologie 454 (séquençage). Il y a des choses qui m'échappent.Comment les microbilles peuvent-il fixer un ADN à la fois.  [...] Pour UNE microbille donné on a hybridation d'UN ADN sb. Puis on effectue une amplification par PCR (l'ADN sb amplifié va se fixer sur une autre amorce de la microbille et ainsi de suite...) et donc au final pour UNE microbille donnée on a le même fragment d'ADN sb qui sont fixées sur toutes amorces C'est bien ça.  [...]

sonde chaude et electrophorèse

Alors je vais pas dire gd chose de peur de dire des betises, mais l'electrophorèse ça consiste à faire migrer des fragments d'ADN sr un gel. Pr les résultats, en fait c'est comme si tu passais du sable dans des passoires dt la maille est de + en + petite. les + petits fragments vont le plus loin.  [...] Je pense qu'il faut aussi que tu recherches des infos sr la PCR (technique d'amplification de l'ADN) parce qu'on en fait svt avt l'électrophorèse pr avoir le fragment en quantité suffisante pour qu'il soit visible.  [...]

[Génétique] Sequençage d'ADN

Sur l'image g, tu ne vois que la moitié des fragments (ceux qui ont leur 3' en vert), les primers ajoutés ne s'hybrident qu'à ces fragments de ssDNA. Chaque paquet possède des fragments qui sont complémentaires, puisqu'ils sont le résultat d'une amplification à partir d'un fragment d'ADN seulement.  [...] Alors, il faut bien distinguer deux phases. La première phase est l'amplification des fragments, c'est le même principe qu'une PCR (les primers sont spécifiques à des adapters, séquences qui ont été ajoutées à chaque bout des fragments d'ADN). L'amplification des fragments est nécessaire pour obtenir un signal analysable (bon signal / noise ratio).  [...]

SYBR green et BET (ou la non compréhension de la PCR en temps réel)

Dans la PCR classique, le BET n'est ajouté que lors du gel (directement dans le gel ou via un bain contenant du BET), il s'intercale dans les molecules d'ADN et fluoresce sous UV. Il permet une semi quantification car en général on revele en fin de reaction donc il s'agit d'une quantité finale.  [...] La différence est que la PCR en soi n'est qu'une technique amplifiant une section d'ADN, il faut ensuite pouvoir l'identifier le plus souvent en faisant une migration sur gel d'agarose coloré au BET (et encore, on peut très bien se servir du Sybr Green). A la fin de la PCR Temps Réel, on a les courbes d'amplification et de fusion Melt Curve, qui permet de vérifier que l'amplification est bien du bon fragment, donc on gagne du temps et du matériel.  [...]

[Biologie Moléculaire] De la PCR à la méthode Sanger

[Biologie Moléculaire] De la PCR à la méthode Sanger.   [...] Après l'amplification d'un brin matrice par PCR, il y aura des produits PCR, pour un séquençage par la méthode de sanger, ces produits pcr doit être purifiés mais lors de la réaction de sanger, comment on évalue la concentration d'ADN, c'est à dire après la PCR on obtient plusieurs fragments d'ADN alors que par la méthode sanger c'est un seul fragment qui sera séquencer à ma connaissance.  [...]

la taq polymérase????

En 1990 1 enzyme appelée taq-polymérase fut élue molécule de l'année.Cette enzyme, une ADN-polymérase d'origine bactérienne a en effet permis l'élaboration d'une technique révolutionnaire d'amplification de l'ADN. La PCR(réaction de polymérisation en chaîne.).  [...] cette méthode, la PCR est également appelée amplification de fragment d'ADN, car elle permet d'obtenir après plusieurs cycles à température variablement hautes, à cause de dénaturation succééssives, un grand nombre de fragments identiques à celui de départ, ce qui revient au résultat d'un clonage avec moins d'inconvénients.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

On détermine les micro-satellite de l'ADN à l'aide de technique de digestion (comme tu le dis toi même, en coupant l'ADN aux bons endroits), ou de PCR (amplification des centaines de milliers à des millions de fois d'un petit fragment, le microsatellite), puis on fait migrer l'ADN sur gel, révélation (aux UV généralement), et hop, on a nos différentes barres.  [...] Par traitement informatique, la marge d'erreur risque d'être importante. En cause, le chevauchement de bandes. Admettons que l'amplification du micro-satellite 1 (exemple) du tube A donne 3 bandes de tailles différentes (50, 100 et 150). La même amplification pour l'échantillon B donne 40, 100 et 180.  [...]