• Forum - Amorces, Restriction, Enzymes, ADN

Un particulier peut il se procurer du materiel de laboratoire ?

Pour les produits. Des amorces, des ADN polymérases, du NaCl2, des enzymes de restriction ecoR1, des ligases ect.  [...] Suivre bêtement un tutoriel qui ne fonctionne pas la plupart du temps Parce que la biologie moléculaire ça s'apprend pas sur YouTube. Enfin la théorie peut être, mais l'expérience montre que SURTOUT en biologie moléculaire, la théorie et la pratique n'ont strictement rien à voir entre elles*.   [...]

amplification de l'ADN

moi, je veux savoir si, au moment de l'ajout de l'amorce, c'est possible de lier au bout de la sequence une suite de nucleotides qui auraient la meme fonction qu'une amorce...cela reviendrait a coller une suite de nucleotides a un brin d'ADN deja coupe. Etant donne que, in vivo, il existe des enzymes qui ont les proprietes de couper et coller des genes ou suites de nucleotides, je me demande si je peux les utiliser pour enchainer des bouts d'ADN.  [...] Et oui, il est également possible de faire des couper/coller de bouts d'ADN avec des enzymes de restriction. C'est comme ça qu'on fait des vecteurs pour transfecter des gènes dans des cellules. Mais c'est pas non plus de la PCR et on se sert pas d'amorces.  [...]

[Biologie Moléculaire] Aflp

-ligation d'adaptateurs aux extrémités des fragments de restriction.  [...] Je dirais. avec des amorces correspondant aux sites de restriction des enzymes utilisées pour découper l'ADN de départ.  [...]

[Biologie Moléculaire] Connaitre séquence génomique....

Cette solution est elle faisable Sur le papier elle est très attirant en effet, mais la ligase n'a t elle pas trop beaucoup de boulot Si quelqu'un a fait cela avec succès je veux bien qu'il se manifeste... Pour augmenter les chances de succés, il faudrait mieux le faire avec une plusieurs enzymes de restrictions.. Merci yoyo.  [...] Pour la PCR inverse, il peut être intéressant d'utiliser une 2eme enzyme de restriction située entre les 2 amorces, de manière à relinéariser le brin d'ADN circulaire. Cela facilite la PCR sur des petits fragments.  [...]

Enzymes de restriction

Pourquoi les enzymes de restriction découpent-elles n'importe quel ADN, sauf celui de la bactérie dont elle provient... qui est protégé.  [...] une petite question sur les enzymes de restriction. elles protègent les bactéries des phages donc elles coupent l'ADN simple et double brin mais sont elles capables de couper l'ARN.  [...]

Besoin que l'on eclaire ma lanterne en Génetique

En amplifiant par PCR, on obtient alors une série de fragments. Comme les sites de fixations sont variables entre les individus, la longueur des fragments va aussi varier. L'étape finale est l'électrophorèse de ces fragments, qui permet d'obtenir une empreinte spécifique du génome.   [...] Je connais moins bien l'AFLP, mais il me semble que c'est la technique utilisée pour les empreintes ADN humaines (par exemple en criminologie). Elle se base sur la restriction du génome, c'est à dire coupure par des enzymes de restriction. On utilise des enzymes ayant un site de restriction assez rare.  [...]

Carte de restriction ( génétique)

Un ADN est digéré par trois enzymes (EcoRI, PstI, SmaI) afin de réaliser une carte de restriction. Après électrophorèse sur gel d'agarose, les résultats obtenus sont les suivants*(taille des fragments observés).  [...] Déterminer la carte de restriction de cet ADN en expliquant clairement et précisément vos choix. Chacun des trois enzymes utilisés reconnaît une séquence spécifique et distincte des deux autres.  [...]

[Biologie Moléculaire] choix des amorces

Je sais qu'aujourd'hui, des sites sur internet permettent de calculer de choisir les amorces les plus adaptées au brin d'ADN qu'on veut dupliquer. Mais j'aimerai connaitre le raisonnement qu'il faut adopter quand on veut prévoir la séquence des amorces sens et anti sens.  [...] Il faut éviter surtout les séquences formant des structures secondaires (genre des tiges boucles). Enfin il faut faire attention a ce que les deux amorces choisies ne s'apparient pas entre elles, ni ailleurs dans le génome/plasmide (donc eviter les longues répétitions monotones de A, ou de C, ou de G, ou de T).  [...]

Dénaturation de l'adn en pH acides

- Une enzyme ne coupera pas l'ADNg de la souche productrice parce que ce dernier est methyle specifiquement pour empecher la coupure.  [...] En milieu alcalin l'ADN sera dénaturé, donc il passera de bicaténaire (double brin) à monocaténaire (simple brin) (les ponts H entre les bases des 2 brins seront détruits) -. action réversible.  [...]

[Génétique] Réarrangements chromosomiques.

On peut simplifier les choses en disant que la cellule dans un premier temps va tout faire pour sauver son ADN, meme au prix d'importantes mutations/recombinaisons/fusions...malheureusement dans la majorite des cas ces rearrangements chromosomiques ne permettent pas a la cellule de fonctionner normalement soit elle meurt, soit elle deviens cancereuse.  [...] -la première, c'est qu'il existe dans la cellule, des enzymes, nucléases je crois, qui coupent les deux brins de l'ADN... Quel avantage pour la cellule d'avoir des nucléases... pour des réparations de l'ADN ressemblent-elles aux enzymes de restriction.  [...]