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[Biologie Moléculaire] amorces de mutagenèse

- J'ai vu sur le site qu'il était possible de deleter un aa (3 nucléotides) avec ce kit, mais comment je construit mes amorces Est ce que je fais comme pour une substitution en enlevant les 3 nucléotides que je veux virer ou faut il que je parte de plus loin ou autre.  [...] Ceci dit une facon simple de faire des déletions, est de choisir les amorces de part et d'autre de la régions a déléter et de faire une PCR classique, suivie d'une phosphorylation et d'une ligation.  [...]

PCR et RT-PCR

On va ensuite pouvoir effectuer une PCR classique sur ces ADNc (c'est alors qu'on va cibler la région d'intérêt, puisqu'on a rétro-transcrit l'ensemble des ARNm).  [...] 3°) Une PCR classique nécessitera au moins 2 amorces (toujours par couples d'amorces), alors que la RT-PCR nécessite 1 amorce pour la transcription inverse, puis les amorces de la PCR effectuée sur l'ADNc.  [...]

qPCR

L'efficacité c'est le coeficient multiplicateur que t'as a chaque cycle, en théorie il est de 2 puisque tu doubles ton nombre d'ADN a chaque cycles, mais en réalité il n'est pas de 2, disons que majoritairement, si tu prend des amorces potables pour une PCR classique, en grande majorité ca varie de 1.  [...] Tu ne peut vraiment pas te passer de calculer l'efficacité des amorces avant de faire du quantitatif, enfin je ne le concois pas, c'est comme faire une PCR classique et oublier de mettre le BET (ou autre colorant) dans le gel, et dire après je ne vois rien c'est dans mon echantillon ya pas le gène en question.  [...]

[Biochimie] Réplication des télomères

ce processus s'applique donc pour les deux types de brins synthétisés, merci. par ailleurs si on veut que la présence d'amorces ne supprime pas de l'information génétique, cela implique que les amorces arn soient synthétisées lors de la réplication en face de régions non codantes du brin matrice, c'est exact.  [...] si on veut que la présence d'amorces ne supprime pas de l'information génétique, cela implique que les amorces arn soient synthétisées lors de la réplication en face de régions non codantes du brin matrice, c'est exact.  [...]

[help ] Principe de la double PCR

Bonjour. Quelqu'un pourrait m'expliquer la double PCR S'il vous plait. Merci.   [...] Hey, si tu fais référence à la PCR simultanée, la différence clé avec la PCR classique, c'est au niveau du choix des amorces, la première tu prends la même qu'en PCR classique & la seconde tu utilises la même méthode que pour la classique quand tu dois choisir l'amorce après l'exon sauf qu'ici tu la choisis juste après le second exon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Design de sonde Taqman à partir d'une sonde FISH

Je voudrais savoir s'il est possible d'utiliser une sonde FISH (ciblant le 16S de bacteroides) comme sonde Taqman pour la quantification de la bactérie, si oui, comment on fait s'il vous plait Mon superviseur me demande d'utiliser la même séquence de la FISH (déjà publiée) pour la RT-PCR, mais aussi de designer des amorces de part et d'autre de cette séquence pour 1 PCR classique.  [...] mais uniquement pour designer les amorces vu que tu as ta séquence pour la sonde taqman. Ensuite, pour une PCR classique, tu reprends les amorces de ta qPCR et c'est parti.  [...]

[Biologie Moléculaire] Primers pour PCR et PCRq

Je cherche actuellement des amorces pour certains gènes inflammatoires chez le mouton, et je ne trouve certains gènes uniquement dans des articles d'il y a plus de 10 ans. ex. GM-CSF.  [...] je n'ai pas pu non plus confirmé mon doute a savoir si les amorces de pcr classique fonctionnent aussi pour la pcr temps réel.  [...]

[Génétique] désignaion d'amorces pour une qpcr

D'arès mes connaissances les amorces doivent etre spécifiques pour quelles ne s'hybrident pas à des régions autres que mes cibles.Mais est ce que je peux désigner des amorces dégénérées etant donnée que les séquences présentent des variations meme dans les régions conservées.  [...] Je vous remercie de votre réponse, en fait j'ai pensé aux amorces dégénérées car les élements transposables sont très ariables et mme dans les regions conservées il existe des substitutions (mutations ponctuelles).  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique SELEX aidez moi!

1. créer un grand oligonucléotide matrice avec trois choses. deux sites d'amorce sens et antisens. Un région centrale (20-25 ntd) que l'on synthétisera pour chacun des oligo de manière aléatoire.  [...] Ainsi on a une collection d'oligo de régions aléatoires portées sur des oligonucléotides bordés de sites d'hybridation pour deux amorces.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquençage et métabarcoding

Aussi je me demandais, losque l'on commande des amorces chez un fournisseur, ils demandent quel niveau de pureté on souhaite (desalted, HPLC,...) J'ai lu que la purification permettait d'éliminer les oligonucléotides tronqués. Est ce que ça sert seulement à ça Du coup pour une PCR classique (en point final), quelle est la purification la plus adaptée, parce que les prix montent vite ^^.  [...] En fait, dans le DNA Barcoding ce sont des séquences du génome qui sont utilisées comme barcode. Les marqueurs sont donc choisis avec soins (ici rbcL et trnL) pour permettre d'identifier les espèces. Je m'explique. ce sont des régions du génome qui sont (en théorie) variables d'une espèce à une autre, mais très préservées au sein d'une même espèce, pour lesquelles des amorces dites universelles ont été design.  [...]