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PCR recherche d'une mutation

Je suis actuellement en angleterre dans un des plus grands centres de recherche et on me demande de rechercher une mutation au niveau d'une proteine du sodium channel, je n'ai jamais fait ca je comprends la moitite de ce que les gens disent bref je suis perdue, j ai differents genotypes puisque differents clones de pucerons et je dois verifier qu ils ont bien la mutation sur cette proteine... je suis sensee faire quoi.  [...] La première chose serait donc de récupérer les séquences des différents génotypes, de les aligner (logiciel Mega par exemple) pour repérer la mutation (s'agit-il d'un SNP ou autre ).  [...]

[Génétique] principe des études moléculaires

Je vais essayer d'amorcer le problème, quelqu'un pourra toujours me compléter ensuite. En effet pour connaitre avec précision une mutation, on peut réaliser une PCR avec des amorces encadrant la région considérée, puis faire un séquençage. Toutefois, le séquençage n'est pas absolument nécessaire et beaucoup d'autres techniques permettent de détecter une mutation en s'en passant.  [...] Pour l'analyse d'une mutation portant sur une région de l'ADN inconnue, on peut prendre une amorce hybridant sur une séquence connue adjacente à cette région. On peut alors utiliser la technique de marche sur le chromosome. on réalise un séquençage qui permet de connaitre une partie de la région inconnue.  [...]

[Génétique] Diagnostic mutation autosomique récessive

l'ADN du patient est extrait à partir d'un pr élèvement de sang veineux. La séquence du gène CFTR étant connue, il est possible de synthétiser deux amorces oligonucléotidiques de part et d'autre de la région de l'exon 10 où se trouve potentiellement la mutation F508del.  [...] Une réaction de PCR permet l'amplification de cette région, que celle-ci soit normale (absence de la mutation deltaF508) ou mutée ( pr ésence de la mutation). La distinction entre les trois génotypes possibles (N/N, F508del/N ou F508del/F508del) peut être obtenue par électrophorèse sur gel de polyacrylamide et visualisation des produits de PCR aux U.V.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutation par PCR

- Tu commandes 2 amorces (1 dans chaque sens) qui chevauchent la région à cloner qui contiennent les mutations à faire en leur milieu.  [...] - Tu obtiens 2 produits de PCR dont les extrémités 5' se chevauchent et dans lesquels la mutation est incorporée. Après contrôle et purification de ces produits, tu fais une PCR en utilisant ces produits comme matrices et seulement les amorces externes. Je conseille l'utilisation d'une polymerase proofreading.  [...]

Utilité de la PCR en médecine ?

Je comprend maintenant que la PCR est avant tout un outil pour amplifier l'ADN. Cependant, il semble évident qu'il soit nécessaire de connaître la séquence de la mutation recherchée pour utiliser des amorces adaptées.  [...] Alors non, tu n'es pas obligé de connaître la séquence de la mutation que tu recherches, car tu peux choisir des amorces qui encadrent le locus de la mutation. Tu amplifies, tu séquences et tu regardes ensuite si la séquence est anormale, et si oui quelle est la nature de la mutation.  [...]

[Biochimie] Analyse résultats PCR - TPE

2. Dans le cas d'une délétion vous ciblez une de vos amorces dans la région disparue. Vous n'amplifiez rien alors que l'on amplifie quelque chose dans la population générale. Idem en reverse pour l'insertion. Vous ciblez une de vos amorces dans la région insérée.  [...] 3. La mutation génère/détruit un site de restriction. Vous le voyez en procédant à une digestion de restriction effectuée sur un produit PCR bornant le site de mutation.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

Ensuite, il faut refaire une pcr en utilisant le résultat des deux pcr pr écédentes comme template et les amorces non mutées qui encadrent donc la région mutée et qui comprennent les deux sites de restriction.  [...] Ensuite, il faut refaire une pcr en utilisant le résultat des deux pcr pr écédentes comme template et les amorces non mutées qui encadrent donc la région mutée et qui comprennent les deux sites de restriction. alors la c'est definitif je suis dans le champs, je vais attendre que l'image soit validee pour voir si ca m'eclaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions relatives à la PCR

Merci Josquin pour la réponse concernant les amorces. Pour le problèm, toutefois, toutes les conditions étaient respectées puisque l'expérience à permit d'obtenir des bandes dont la taille était attendue. Toutefois, j'aimerais savoir pourquoi certaines bandes sont moins intenses après amplification.  [...] Je vous évites tous les détails qui m'ont ensuite mener à effectuer la réaction PCR en utilisant les amorces oligo plat A (en amont) et oligo plat B (en aval) ainsi que la taq polymérase... bien sur. Après les cycles, j'analysais les produits PCR sur un gel d'agarose et tra-la-la.  [...]

PCR (amplification génique)

Souvent en biologie on est limité par la quantité de matériel biologique. La PCR est donc une méthode géniale et puissante puisque l'amplification est exponentielle. En plus les cycles de PCR sont relativement courts (environ 3 minutes il me semble) ce qui fait gagner beaucoup de temps par rapport à une amplification sur culture de bactéries transformées (beaucoup moins d'étapes aussi).   [...] En plus de ça, si tu as un long fragment et que tu as une région d'intérêt à l'intérieur, grace à l'encadrement de la région par les amorces de PCR, tu peux choisir avec précision ton fragment d'intérêt. Bref, je vais pas rentrer dans les détails tellement les applications de la PCR sont nombreuses.  [...]

Exo

Une fois que tu sais ça (c'est en gros ta question 1), il faut regarder les couples d'amorces proposées, une doit être une partie de la région 1 (sense) et une de la région 2 (reverse). Toutes les amorces proposées dans l'exo ne pr ésentent pas les mêmes propriétés (sens d'élongation, endroit d'appariement, taille du fragment amplifié).  [...] Donc pour ton exo, les paires d'amorces sont différentes, elles donneront des fragments d'adn de tailles différentes, voire pas, c'est juste une application pour voir si tu as compris comment faire des amorces et la manip en elle même.  [...]