• Forum - Amorces, Région, ADN

aide pour un protocole (PCR, DGGE...)

On extrait donc l'ADN total du sol, on amplifie la région de l'ARN 16S avec des amorces universelles. Puis le produit PCR est analysé par électrophorèse. Pour identifier les bactéries on utilise l'ARN 16S parce que cette région est très conservée en raison de son rôle dans la synthèse des protéines.  [...] La solution est double. Soit on séquence les régions 16S obtenues (ce qui est coûteux), soit on trouve une autre solution et cette solution c'est la DGGE.  [...]

[Génétique] PCR, marqueur biologique

2. Hybridation des amorces qui encadrent la région que l'on désire amplifier (région d'environ 1*000 bases). Les amorces sont mises en excès -. 50-60°C.  [...] 3. Extension des amorces de 5'-. 3' via une ADN polymérase thermostable, ce qui permet de synthétiser un nouveau brin d'ADN artificiel qui sera strictement complémentaire du brin qui a servi de matrice -. 72°C.  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions relatives à la PCR

Merci Josquin pour la réponse concernant les amorces. Pour le problèm, toutefois, toutes les conditions étaient respectées puisque l'expérience à permit d'obtenir des bandes dont la taille était attendue. Toutefois, j'aimerais savoir pourquoi certaines bandes sont moins intenses après amplification.  [...] Je vous évites tous les détails qui m'ont ensuite mener à effectuer la réaction PCR en utilisant les amorces oligo plat A (en amont) et oligo plat B (en aval) ainsi que la taq polymérase... bien sur. Après les cycles, j'analysais les produits PCR sur un gel d'agarose et tra-la-la.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteur banque BAC

Tout dépend de la longueur de promoteur que tu veux mettre en amont du gène rapporteur. S'il n'est pas très long, tu peux réaliser une PCR avec des amorces encadrant la région promotrice que tu désires. En 5' des amorces tu ajoutes la (les) séquence(s) de restriction correspondant au(x) site(s) de restriction que tu as choisi sur ton vecteur pour l'intégration du promoteur.  [...] Ainsi tu as des bactéries sur la membrane de nitrocellulose. Ensuite, tu réalise une hybridation de sondes chaudes spécifiques de ton promoteur, tu révèles en autoradiographie et tu vois quelles colonies sont marquées. Pour être sûr que ton promoteur est entier, tu peux éventuellement faire deux répliques.   [...]

Sondes nucléotidique

J'ai une petite question concernant les sondés nucléotidique... Je ne comprends pas le principe. Dans mon cours est écrit qu'une sonde est capable de s'hybrider sur un acide nucléique. Pourquoi faire des sondes de 100 bases pour détecter un seul acide nucléique Je ne comprends pas l'intérêt en fait.   [...] Dans mon cours sur les techniques d'étude de l'ADN.. On dit que les amorces font 18 à 30 nucléotiques, je ne comprends pas cette notion d'amorces.. Puis c'est marqué que les sondes à proprement parler font 100 bases et qu'elles vont s' hybrider sur un acide nucléique que l'on souhaite étudier.  [...]

Biotinylation dans l'hybridation inverse

au sujet de l'hybridation inverse, si j'ai bien compris, on amplifie l'ADN à l'aide de plusieurs couples d'amorces, dont seulement une (amorce dans le couple) est biotinylée.  [...] pour aller à l'essentiel (parce que suis pas du tout claire je sens...). est-ce bien l'amorce complémentaire de la séquence d'intéret, seulement, qui doit etre biotinylée.  [...]

[Génétique] problème d'extraction d'ADN

ouii je vérifie la qualité de mon ADN directement après chaque extraction et les ratio de puretés sont bons autour de 1.8 mais enfaîte je conserve mes ADN dans un simple congélateur à -4 ° et même je ne met pas des inhibiteurs d'ADNase puisque j'utilise un kit d'extraction et pas un protocole de CTAB dont je peux mettre le Mg + EDTA.  [...] Qu'est ce qui vous fait dire que l'ADN se dégrade Car vous n'amplifiez pas votre fragment en PCR Peut être un problème de PCR, d'amorces,  [...]

[Biochimie] Amorces ARN/ADN et Réplication/PCR

Pour la réplication il faut bien une amorce d'ARN synthetisée par une primase, puis l'ADN polymerase prend le relais (elle est malgré cela ADN dependante vu que son brin matrice est de l'ADN ou bien on se refere à la matrice et alors elle est ARN dependante).  [...] N'importe quelle extrémité 3'OH (ADN ou ARN) peut servir d'amorce pour les DNA polymérases. On utilise des amorces ADN en PCR parce que l'ADN est plus stable et plus facile à synthétiser que l'ARN.  [...]

[Génétique] Problème de PCR

Mon segment d'ADN est constitué d'une suite de répétition de 6 bases. L'idée est d'utiliser une seule amorce (complémentaire à ma séquence répétitive) en espérant qu'elle se fixera au moins quelques fois au début du segment. Le profil que je m'attends à observer correspondrait à une série de pic avec le plus grand correspondant à la longueur de mon segment d'ADN.  [...] En fin de PCR, tu obtiendra tout simplement, le brin d'ADN amplifiable le plus court possible. C'est ce qui doit correspondre à tes 50 paires de bases, soit une longueur de 2 amorces.  [...]

[Génétique] PCR, marqueurs moléculaires

Comme cela vous a été signalé dans un autre message, il est IMPERATIF de faire preuve de courtoisie dan iles messages, ainsi que d'utiliser des titres EXPLICITES. Ceci est un avertissement et les messages ne respectant pas ces consignes seront supprimés, à l'avenir.   [...] C'est très simple en faite, la PCR veut dire Réaction en Chaine de la Polymérase, quand tu souhaites amplifier un fragment d'ADN d'une certaine taille en kb, tu peux avec des amorces, les 4dNTP, une polymérase thermorésistante et l'ADN double brin et le processus qui s'en suit, obtenir après un certain nombre de cycle, ta molécule d'intérêt en grande quantité.  [...]