• Forum - Amorces, Extrémités, Fragment

[Biologie Moléculaire] ADN complémentaire et PCR

3) Si nous avons un vecteur recombinant avec un fragment d'intéret et que nous souhaitons amplifier par PCR uniquement ce fragment d'intéret. en utilisant 2 amorces spécifiques des extrémités de ce fragment, faut-il.  [...] d'abord linéarisé le vecteur par un autre enzyme ou meme en le laissant circulaire, on ampliefiera seulement le fragment.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

Séquencer ne donne pas physiquement le fragment. Il faut que vous ayez déjà le ou les fragments pour pouvoir les séquencer (littéralement. en connaître la séquence, l'enchainement des acides nucléiques qui les composent).  [...] Ce sont les mêmes. Si vous souhaitez cloner dans le site BamHI d'un vecteur et que votre fragment d'ADN ne porte pas de site BamHI, vous allez créer des amorces PCR contenant NNNNNN-BamHI-extrémité5'dufragment et NNNNNN-BamHI-extrémité3'dufragment (antisens) Votre fragment amplifié sera NNNNNN-BamHI-fragment-BamHI-NNNNNN et vous pourrez générer votre fragment avec des extrémités BamHI libres qui pourront liguer avec celles de votre vecteur.  [...]

Aide pour PCR svp

Ben je sais mais cela ne fonctionne pas j'arrive à génener mon fragment central avec soit le morceau en 5' soit en 3' mais apres je n'aarive pas à rajouter le morceau manquant. J'ai un couple d'amorce à cheval entre le petit fragment en 5' et le central et a cheval entre le petit fragment en 3' et la partie centrale, j'ai un couple d'amorce aux extrémités des petits fragments et un couple d'amorce aux limites de ma partie centrale.  [...] fais d'abord une première PCR avec deux fragments, puis purifie ton produiit et refais une PCR avec celui-ci et le troisième fragment, avec les amorces adéquates.  [...]

microbiologie - CARTE DE RESTRICTION

Le fragment X-300-X pourrait a priori faire partie des fragments de S-1100 pb-S ou de S-1200 pb-S. Mais on vient de voir que le fragment de 300 pb du fragment S-1100-S est a une des extrémités donc il est X-300-S. Donc le fragment X-300-X fait partie du grand fragment S-1200-S.  [...] et maintenant, il suffit de comparer les extrémités de ce super fragment avec celles du dernier fragment pas encore placé. X-600-S-800-S-1000-S-400-X ou X-600-S-1000-S-800-S-400-X.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

Un fragment NcoI/NcoI de taille 1Kb. après marquage des extrémités 5'P on parlera de sonde N.  [...] Un fragment HindIII/HindIII de taille 0,3Kb. après marquage des extrémités 5'P on parlera de sonde H.  [...]

[Biologie Moléculaire] Connaitre séquence génomique....

Ensuite tu prends des oligos qui se trouvent a chacune des extremités du fragment connu, mais qui sont orientés vers l'exterieur du fragment.  [...] Pour la PCR inverse, il peut être intéressant d'utiliser une 2eme enzyme de restriction située entre les 2 amorces, de manière à relinéariser le brin d'ADN circulaire. Cela facilite la PCR sur des petits fragments.  [...]

aide pour réaliser les PCR

La Taq polymérase (si c'est cette enzyme-là qui est utilisée) travaille idéalement à 72°C. Il faut environ 1 minute pour synthétiser un fragment de 1 kb. Pour l'extension finale, 2 minutes à 72°C.  [...] Pour tout ce qui est design des amorces et Tm, les logiciels calculent ça automatiquement. Y a même des sites internet où tu rentres ta séquence et tu specifies la zone à amplifier. Ils te trouvent les meilleures amorces et te donnent les statistiques (%GC, Tm, autocomplémentarité...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment fabriquer une amorce PCR

eaahhh.. Désolé j'avais mal compris la question. Les amorces sont réalisées par synthèse en phase solide. Le premier nucléotide est fixé covalemment à un support comme tu peux le voir ici, puis les autres sont rajoutés un par un. On utilise le même principe pour synthétiser des peptides.  [...] Par exemple, si vous voulez amplifier la région 500 à 1000 d'un gène, alors vous prenez une amorce s'hybridant du nucléotide 500 au nucléotide 520 (car les amorces que l'on utilise font le plus souvent 20 bases) en orientation sens (même séquence que la séquence codante du gène), et vous prenez une amorce s'hybridant du nucléotide 1000 au nucléotide 980 en orientation antisens (séquence complémentaire à la séquence codante du gène).  [...]

[Biotechnologie] Principe de la PCR

montrer la meilleure complémentarité possible avec les deux extrémités de la séquence d'intérêt que l'on souhaite amplifier. L'une des amorces.  [...] à des dimères d'amorces et parfois aux amorces elles-mêmes. Selon les conditions réactionnelles, il arrive que des fragments non spécifiques.  [...]

compter des cellules/marquer de l'ADN/transgenese

Il te suffit de faire une construction dans laquelle tu encadres ton ADN d'intérêt, par 2 séquences présentes chez le porc. Tu auras une recombinaison homologue et une insertion site spécifique entre ces 2 séquences sur le génome de ta bestiole. Ca se passe par linéarisation interne ou externe, à savoir qu'une linéarisation externe est mieux pour la stabilité qu'une linéarisation interne (car dans ce dernier cas tu peux de nouveau avoir des recombinaisons homologues après ton insertion.).   [...] Dans tes cellules ES, tu transfectes simplement un fragment avec des extremités homologue et ca recombine ou tu dois induire la recombinaison.  [...]