• Forum - Aide, Précipitation, ADN

extraction d'Adn

je voudrais savoir à quoi cela sert l'étape où l'on ajoute de l' acétate de potassium au broyat de tissu,(préalablement incubé à 65°C avec tampon de lyse et proteinase K )et que qu'on laisse incuber dans de la glace.   [...] L'acétate de sodium permet de tamponner la solution, neutraliser les phosphates et cela aide également à la précipitation de l'ADN (en ajoutant un alcool comme l'isopropanol).  [...]

[Biologie Moléculaire] Alcool isoamylique

L'isoporopanol peut effectivemet être remplacé par l'éthanol, mais à 100%et non 70%. L'avantage de l'isopropanol par rapport à l'Ethanol est de pouvoir deshydrater l'ADN avec un volume moindre d'alcool. C'est pour cela que lors d'une précipitation à l'éthanol on rajoute 2 volumes d'Ethanol 100% pour 1 volume de solution contenant l'ADN (ce qui donne 70% env.  [...] Dans ce cas le culot est étalé sur le tube, et pas vraiment visible. Un moyen d'aider, et d'ajouter du glycogen au moment de la précipitation, qui sert de carrier pour l'ADN et aide à visualiser le culot.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dilution d'ADN "contaminante"?

Pour MaliciaR. ADN visqueux = culot après précipitation à l'Ethanol mal resuspendu, ou présence d'ADN génomique (volontaire ou non.). Pour aider, il est possible d'incuber @ 50°C pendant 10min pour aider à la resuspension. Dans le cas d'ADN génomique, on peut soniquer (tout dépend des applications que l'on veut faire après, mais 10-30s suffit largement).  [...] Sinon, j'ai extrait mes ADN à partir de tissus animaux lysés 3h à 55° au bain-marie, puis phénol/chloroforme avec des tubes contenant un gel bloquant la phase P/chlo (très pratique) et Éthanol précipitation avant de reprendre mon culot dans de l'eau.  [...]

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse?

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse.  [...] J'aimerais savoir pourquoi le rendement de la précipitation de l'ADN dans de l'éthanol augmente lorsque l'on baisse la t°.  [...]

[Biologie Moléculaire] Précipitation d'ADN linéaire

J'ai effectué une précipitation d'ADN linéaire et malgré mon application, mon rendement était de seulement 38%. Je voudrais simplement avoir des raisons plausibles qui pourraient expliquer un mauvais rendement, autre que des erreurs de manipulation basiques.  [...] Je manque un peu de détails pour faire un diagnostic mais en général les problèmes de rendement d'un précipitation d'ADN sont dus à deux facteurs.  [...]

[Biologie Moléculaire] précipitation de l'ADN diminution de la taille de mon fragment!!!

[Biologie Moléculaire] précipitation de l'ADN diminution de la taille de mon fragment.  [...] Je vois que deux solution. Lors de ta purifiaction ton ADN à été maltraité et à été coupé à 2000pb et le reste est partie à la poubelle.  [...]

[Biologie Moléculaire] mutagenèse dirigée

et, es ce que la précipitation par les sels a les mêmes effets que celle produite par les solvants organiques sur la quantité d'ADN.  [...] pour l'ADN es ce que c'est vrai qu'avec la précipitation avec le sel, on aura de l'ADN plus concetré que celle en utilisant les solvants.  [...]

milieu de culture

Pour l'ADN plasmidique, pas de protéase. À la place, précipitation par saturation alcaline. Centrifugation, conservation du surnageant et élimination du culot. Enfin précipitation à l'éthanol.  [...] Merci et excusé moi si j'ai trop exagéré oui pour la croissance comme je vous es dit toute a l'heure j'ai mis une préculture en ISP4 liquide (2ml) laissé incubé a 30°C pendant 48h avec agitation et après la mettre dans un milieu ISP2 + 10% saccharose et incubé a 30°C pour 48h avec agitation.   [...]

[Biologie Moléculaire] Précipitation d'ADN

je n'ai jamais entendu parler d'une précipitation mais je peux t aider par le faite d'utiliser l'ethanol est indispensable pour précipiter l'ADN car ce dernier est insoluble dans l'alcool de Moncef.  [...] Tout a fait exacte, je crois qu'historiquement c'est parceque l'alcool deviens plus visqueux a basse température. mais ca ne change rien pour l'efficacité de précipitation.  [...]

[Biologie Moléculaire] RNase A

Merci. C'est à peu près ce que je pensais faire... Mais ensuite Dois je refaire un chloroforme et une précipitation de mon ADN pour éliminer la RNase Juste une précipitation.  [...] je dirais que ça dépend de ce que tu comptes faire avec ton ADN ensuite... Précipitation ou phénol/chlo ou meme juste inactivation (je sais pas si c'est possible avec la RNase).  [...]