• Forum - Aide, Fixation, Protéines

[Microbiologie] Mise en évidence système SOS bactéries

Le système SOS fonctionne lorsque LexA, le répresseur des gènes impliqués, est détruit par fixation à la recombinase A et à l'ADN. Cela permet donc d'activer les gènes SOS et de former des protéines umuD (qui subit une maturation par recA) et umuC qui s'associent et permettent la réplication fautive (avec l'aide de recA).  [...] Sous l'effet d'un stress, l'accumulation des dommages à l'ADN génère des arrêts de réplications et entraîne la réponse SOS pendant laquelle recA forme des nucléofilaments avec l'ADN au niveau de régions simple brins d'ADN. la protéine LexA a plus d'affinité pour ces filaments que pour ces opérateurs ce qui lèvent la répression et induit l'expression des gènes.  [...]

Acylation / Farnésylation / Prénylation

Acylation = modification de protéines par fixation covalente d'un ou plusieurs acides gras via une reaction d'acylation ( = formation d'un lien ester, amide ou thioe s ter).  [...] L'acylation de certains protéines G monomériques (Ras, Rho...) est indispensable à leur activité fonctionnelle. Plusieurs d'entre elles se terminent par la séquence consensus de prénylation CaaX sur laquelle est fixée le résidu d'acide gras isoprénoïde. Les inhibiteurs de la farnésyl-transférase sont utilisés en cancérologie pour bloquer la farnésylation de Ras.  [...]

HPLC sur des protéines déjà dénaturées

J'ai déjà réalisé un test de densité (fixation de toute les protéines à une densité connue, puis on compte les protéines fluorescentes).  [...] On sépare ainsi facilement l'excès de sonde fluorescente, de la protéine marquée mais, par contre, la séparation protéine native/protéine marquée x fois est mauvaise. On détermine approximativement le taux de greffage par analyse du spectre MS déconvolué.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse SDS-page

Pour la fixation des protéines sur mon gel. le méthanol et l'acide acétique.  [...] Moi aussi ils sont tous frais mais les constituants, je m'en cogne un peu ^^ il y a juste les solutions de préparation que je dois faire.   [...]

[Biologie Moléculaire] Problème DAPI & Cellules

Je viens à vous car je suis un peu déspespéré. Voila maintenant un long moment que je travail avec des HEK 293 ECACC sur lesquels je réalise des immunocytochimie afin de marquer une protéine. Au départ tout fonctionnait bien mais depuis quelque temps j'obitiens des résultats étrange avec mon marquage au DAPI.  [...] Je travail donc sur des HEK 293, elles sont utilisée sans antibiotique et ne sont pas contaminées. Pour la fixation. PAF 4%. Le DAPI est ajouté a la fin durant 5 minutes. Puis les lamelles sont montées sur une lame à l'aide de MOWIOL. Merci de votre aide.  [...]

Récepteurs tyrosine kinase

J'ai un doute. Je sais que la fixation du ligand sur un récepteur tyrosine kinase provoque sa dimérisation et la phosphorylation du récepteur sur ses tyrosines intracellulaires. Mais j'ai l'impression de lire que le récepteur une fois phosphorylé sur ses tyrosine phosphorylerait aussi d'autres protéines comme GRB2.  [...] Il phosphoryle des protéines intracellulaire. C'est nécessaire à la transduction du signal. Mais la première étape est bien une autophosphorylation. D'ailleurs je crois pas que tous les RTK se dimérisent apres la fixation du ligand (cest pas le cas des récepteurs de l'insuline, de IGF par exemple).  [...]

Au secours la RMN va finir par m'achever...

guil,juste une petite précision... pourrais tu me dire si à partir de ces spectres, on peut identifier le site de fixation du ligand sur la protéineJe précise. en cours, on nous a montré 2 spectres, 1 de la protéine et un protéine + ligand saturés, et on voit effectivement certains pics correspondant à la protéine seule et donc par déduction les autres pics observés sont ceux du ligand, mais peut on à partir de ces deux enregistrements préciser le site de fixation du ligand sur la protéine.  [...] Par contre le % de saturation des noyaux du ligand varie, selon son interaction avec la protéine, le transfert de saturation va être plus ou moins fort. Tu peux ainsi avoir une idée quel motif du ligand est au contact avec la protéine, mais pas d'informations spatiales sur le site de fixation protéique.  [...]

Comment les protéines et l'ARN peuvent-ils agir sur les genes?

Certaines protéines appelées promoteurs peuvent venir se fixer sur l'ADN, sur certains secteurs spécifiques à proximité de gènes particuliers. Ces protéines vont faciliter la fixation à cet endroit de l'ARN polymérase, et donc accélérer la transcription en ARN.  [...] A partir de l'ADN tu obtient (entre autre) par la transcription des ARN pre-messager, qui sont maturés en ARNm qui sont traduit par les ribosomes (via les ARNt) en proteines.  [...]

[Biochimie] Fixer des protéines dans un gel

Je souhaite, après fixation des protéines dans mon gel, regarder ces protéines (fluorescente) au microscope (capable de voir une molécule...).  [...] Par contre, dès que j'essaie de les fixer (avec du TCA, par exemple), là, je perds carrément les petites protéines (diffusion dans le tampon de fixation + dans les lavages, probablement), et les grosses sont également plus faibles.  [...]

genes eucaryotes

Le rôle des gènes est de coder pour les protéines nécessaires au métabolisme des êtres vivants. Chez les eucaryotes, organismes ayant un noyau cellulaire, un gène est constitué de différentes zones. on dit qu'il est morcelé. Certaines régulent sa transcription, c'est-à-dire sa copie sous forme d'ARN messager qui sera ensuite traduit en protéine.  [...] - Promoteur.La zone promotrice porte le site de fixation des enzymes permettant la transcription du gène. Elle porte également des sites de fixation pour d'autres protéines, l'ensemble formant le complexe d'initiation de la transcription. - Introns.Les introns sont des segments d'ADN non codants insérés entre les exons (parties codantes).  [...]