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[Biologie Cellulaire] Rapport quantité ADN/expression protéique Transfection transitoire

Est ce qu'il y a un rapport entre la quantité d'ADN que l'on transfecte et le taux de protéine exprimé au sein des cellules.  [...] Ca me paraît difficile de faire une règle générale. Ca doit déjà dépendre de ce que tu appelles ADN (un plasmide j'imagine), du promoteur, des conditions... Je pense que la seule façon de le savoir est d'essayer.  [...]

Pureté de l'ADN / efficacité d'expression

Certains d'entre vous ont ils déjà constaté que la pureté de l'ADN au départ pouvait affecter la capacité des cellules, ensuite, à exprimer *correctement* les protéines Je ne parle pas ici de taux de transfection, qui est bon, ce que m'indique la GFP co-transfectée par exemple.  [...] pour ce qui est de la pureté de ton ADN pour les transfections, si tu tourne autour de 1,6-1,7 c'est vraiment bien. Pour être honnête, moi j'avais une prép de plasmide qui tournait plutôt autour des 1,4-1,5 et mes transfections sur cellules marchaient très bien, y compris le taux d'expression de la protéine qui convenait pour mon type de manip.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transduction/transfection

Je suis d'accord avec Delphinette. Après, la méthode à utiliser dépend de ce que tu veux faire. Si c'est pour une expression transitoire, il est beaucoup plus simple d'utiliser un liposome, car même avec un taux de transfection très faible, tu peux voir ta protéine exogène facilement en western-blot.  [...] Tu peux faire une lignée stable avec la lipofectamine, c'est juste que le taux de cellules transfectée est faible, et le taux de cellules ayant intégré l'ADN encore plus faible... D'où le moins rapide/moins efficace. Car avec un vecteur viral, tu auras beaucoup plus de cellules transduites et si c'est un vecteur intégratif, tes cellules qui auront été transduites vont intégrer efficacement cet ADN, ce qui n'est pas le cas avec la lipofectamine qui ne pemret pas d'intégrer l'ADN.  [...]

[Biochimie] Dosage proteine totale sur FHN

J'evalue l'activité de certaine molécules sur deux type de cellules, les FHN et les HaCAT. Pour evaluer cette activité je fais un dosage BCA sur les culots cellulaire pour determiner le taux de proteine totale.  [...] Sur les Hacat la coloration se réalise au maximum en 20mn alors que sur les FHN la coloration se fait en minimum en 2h30mn. Tout d'abord j'aurais voulu savoir si pour certain d'entre vous le constat etait le même. Ensuite j'aurai voulu savoir si ajouter une faible dose de soude pour eclater les membranes et donc acceler la coloration etait une bonne solution.   [...]

[Biologie Cellulaire] Mitose/Méiose

J'ai oublié de parler des systèmes de réparation de l'ADN qui permettent d'affaiblir le taux de mutation de manière considérable. Ces systèmes confèrent à nos cellules une grande stabilité génétique, contribuant donc à la stabilité phénotypique de l'espèce.  [...] Les gamete ne sont pas elle des cellules souche car une cellule souche par definition est pluripotente ou totipotente, ce qui implique qu'elle pourrait encore se transformer en une cellule differente (de peau par exemple) ce qui n'est pas le cas bien evidemment.  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme

2) l'électrophorèse montre que le sujet malade est homozygote pour le gène altéré, il ne synthétise pas le gène codant pour une protéine de correction de l'ADN, normale, et parsuite l'enzyme est inactive et le taux de dimères de thymines reste cst.  [...] Tu l'as bien fait je pense à part le fait que t'as oublié de dire que à l'échelle cellulaire la protéine ERCC3 était non fonctionelle.  [...]

[Divers] Duplication de l'ADN

La mitose donne, à partie d'une cellule mère... (je te laisse finir ma phrase) la réponse est là.. Où sont parties les bases azotés marqué au 15N Quelle est la spécificité de la duplication elle est semi... (je te laisse finir ma phrase).  [...] En fait si je comprend bien le chromosome est radioactif, mais quand il se duplique, une chromatide est 14N et l'autre 15N. ça fait du 50% 50%. Puis reduplication, comme on a 2 cellules maintenant une 15N et une 14N, on obtient une cellule 15N une 14N du à la duplication de la cellule 15N, et 2 14N du à la duplication de la 14N. donc 25% 15N 75% 14N.  [...]

[Evolution] [évolution] La probabilité des mutations "favorables"?

enfin il est interessant de noter que certaines mutations permettent justement d'augmenter le taux de mutation spontanee dans la cellule... c'est notament le cas lorsque la mutation apaprait dans un gene codant une proteine intervenant dans la correction des erreurs de l'ADN.  [...] Ils n'essayent pas de construire des protéines à partir des acides aminés ou des gènes à partir des acides nucléiques. ils emploieront simplement les protéines et les gènes préexistants d'une cellule vivante. Ils ne commencent pas par des éléments de base que l'on peut trouver dans la nature, mais avec des macromolécules complexes déjà construites qui ne pourraient jamais être synthétisées à partir de ces éléments de base à travers un processus naturel.  [...]

Organites cellulaires

Elle jouerait un rôle lors de la transcription des gènes codant pour les ARNr et l'empaquetage de ces ARNr lors de l'assemblage des ribosomes. Cette protéine a été identifiée dans de nombreuses espèces et la comparaison des séquences montre qu'il existe une grande conservation de séquence au cours de l'évolution.  [...] La nucléoline aide à la décondensation de la chromatine en se fixant sur la protéine histone H1. Apparemment, la nucléoline possède un domaine N-terminal phosphorylé qui lui permet d'intéragir avec H1 (mais je ne pense pas qu'elle phosphoryle H1).  [...]

[définition] Votre définition de l'espèce ?

..ils se tous bien planté. Car aujourd'hui, la théorie la plus admise dans ce domaine consiste à dire qu'il y a non pas un programme (comme l'aurait fait penser C.elegens) comdamnant les cellules à la mort après un certain nombre (pré-programmées) de divisions, mais plutôt qu'il a y compétition entre la capacité qu'a une cellule (souche) de suporter les mutations (systeme de réparations de l'ADN, et junk DNA qui pour le coup ne serait plus si junk et si egoïste que ça, puisqu'il servirait à (encore un abus de language.  [...] Ne te trompes-tu pas Horloge moléculaire=rythme d'évolution d'une protéine ou d'une séquence d'adn donnée, non Elle est constante pour chaque gène donné mais varie d'un gène à l'autre car si le taux de mutation reste constant, la proportion de mutations neutres peut être différente selon le gène concerné.  [...]