• Forum - ADN, Tampon, Migration

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Le tampon de migration surtout est toxique. L'acrylamide, bah... c'est aussi toxique. Quant aux révélateurs, c'est pire. Même en essayant de faire plutôt avec la fluorescence de l'ADN sous lampe UV, ça reste du domaine de la fiction de séquencer de l'ADN chez soi.  [...] Quand au gel, un simple gel d'agarose fait l'affaire, le tampon de migration phosphate est bon aussi. je crois qu'il est également possible de marquer l'ADN à l'aide de nitrate d'argent (vieux matériel photographique). Bref, à part l'étape de PCR, tout est théoriquement faisable dans la cuisine (ultra-propre pour éviter les contaminations ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

pour le tampon de charge je ne pense pas pour le tampon de migration je le change régulierement (environ toutes les 2/3 migrations).  [...] tu dis que tu purif sur colonne avant de déposer. Tu le fais systématiquement Car ca ressemble à une migration d'ADN dans un tampon un peu spécial qui modifie la migration. Quand je dis tampon spécial c'est le conditionnement de ton ADN par rapport à de l'eau.  [...]

Solution tampon électrophorèse

L'électrophorèse consiste à faire migrer des molécules grâce à un courant électrique qui va traverser le gel (d'agarose ou de polyacrylamide par ex) qui contient tes échantillons. Il te faut forcément quelque chose pour conduire ce courant. il s'agit de la solution tampon, qu'on appelle aussi tampon de migration.  [...] En général, la solution tampon va non seulement permettre de maintenir le pH à une valeur donnée mais aussi de stabiliser les charges, de façon à ce que tes molécules soient regroupées sur base de leur poids et de leur charge. si une molécule comme l'ADN chargée négativement était mise dans une solution sans tampon, elle s'accaparerait des protons de ta solution et la migration en se ferait pas aussi bien.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

deuxième souci, quand j'ai essai de spoter l'ADN dans le puits de gel, il se diffuse directement en dehors de puits dans le liquide de mogration (TBE), après j'ai changé le tampon de charge, et c'était marché avec quelque échantillons.  [...] Le tampon de charge ne permet pas de précipiter l'ADN mais de le faire couler dans les puits. Êtes vous sure que vôtre système de migration ne présente pas un problème au niveau de la tension par exemple ou alors une électrode qui ne marcherait pas (est ce que ça fait des bulles).  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse (ADN sur Agarose) et Bromure d'éthidium

Si vous avez perdu du signal en laissant trop migrer votre ADN et que vous n'avez pas mis de BEt dans le tampon de migration, vous pouvez également récupérer ce gel et le mettre dans un bain de tampon de migration + BEt + agitation. Il faut incuber pendant un bon moment quand même, donc s'il vous reste de l'échantillon ça peut être plus rapide de refaire un gel et d'en redéposer (en laissant moins migrer cette fois ou en mettant du BEt dans le tampon cette fois ).  [...] Personnellement, je n'ai jamais entendu quelqu'un mettre du BET dans le tampon de migration, je n'ai jamais vu non plus de la perte de signal (en tout cas, visible) lorsque le BET est ajouté lors de la préparation du gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr-sbt

- il contient un colorant (bleu de bromophénol, oranger...) qui permet de suivre la migration à l'oeil nu (pour éviter que de faire migrer l'ADN trop longtemps et éviter qu'il ne sorte du gel...).  [...] - certains contiennent également des composants qui ont la particularité de se lier à l'ADN et d'en augmenter la densité. ainsi ton échantillon reste bien au fond du puits et ne se disperse pas dans le tampon de migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

Je soupçonne ma méthode d'extraction car l'échantillon avec lequel j'ai retrouvé la 2ème bande n'a pas été extrait de la même façon que ceux que j'ai analysé ensuite (robot Qiagen vs tampon maison + PK), même si ça n'explique pas pourquoi j'avais perdu cette bande pour cet échantillon (dégradation ).  [...] J'ai testé beaucoup de paramètres pendant 2 mois (ADNg, tampon d'extraction, tampon de PCR, primers, machine PCR, tampon de migration...) et je ne trouve pas l'origine du problème.  [...]

[Génétique] Electrophorèse-ADN

Sinon en plus du bleu de dépôt, il y a du glycérol dans votre solution afin de faire tomber l'ADN au fond de chaque puits et pour qu'il puisse migrer grâce au tampon de migration moins dense.  [...] L'ADN linéaire migre en fonction de la taille du fragment sans autre ajout. Pour être plus précis, la charge du fragment augmente avec la taille. Les fragments les plus gros devraient donc avoir une migration facilitée. cependant, la résolution du gel freine plus les gros fragments que les petits.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Peut-être que tu charges trop de protéines Le fait que le profil de migration du marqueur moléculaire soit OK indique que le pb vient de tes échantillons -. vérifier donc le tampon de charge (il semblait marcher avant) et ton matériel initial...tu resuspends combien de culot de bactérie Essaie avec moins.  [...] Je viens de refaire un gel avec des tampons d'une collègue ainsi que son tampon de charge qui fonctionnent très bien ensemble. Mais visiblement dans mes mains non. J'ai toujours un front de migration flou et des bandes de protéines pas très nettes... *PAN*.  [...]

[Biochimie] Chromatographie d'exclusion

Conseil. le gel c'est des petit billes, elle coulent mais au moindre mouvement de l'eau elles bougerons. Donc pour éviter ça au maximum pendant la migration (après le dépos) met 3 ou 4 cm de tampon en réserve au dessus du gel. Comme ça quand tu en rajoutera ça brassera moins le gel que si le niveau de tampon est a raz (tu me suis).  [...] Pour résumer tu ouvre le robinet pour faire descendre le niveau du tampon a raz le gel quand tu va faire ton dépôt et quand tu fait ta migration.  [...]