• Forum - ADN, Tampon, Intensité

purification d'ADN sur gel

J'ai un problème avec la purification de l'ADN excisé à partir du gel. le volume d'ADN que je récupérè après élution est très faible sachant que j'utilise un it de purification et que le volume du tampon d'élution que j'utilise est choisi en fonction de l'intensité de la bande de départ.  [...] je dépose des produits PCR que je purifie avec le kit promega à partir du gel. les intensités des bandes des produits PCR diffèrent.Il y a des bandes qui présentent une intensité moyenne ou faible donc je minimise le volume du tampon de dilution pour que ça ne soit pas trop dilué.  [...]

Conséquence de la concentration d'un tampon électrophorèse sur l'intensité

Que faireIlme semblait pourtant qu'en diminuant la concentration du tampon, j'augmentais sa résistance et donc diminuais l'intensité pour une meme tension.  [...] Pour obtenir une tension de 90 V j'ai dilué le tampon concentré 10X (fourni avec le kit) au 20ème(conctration finale 0.5X TBE) Avec cette nouvelle concentration l'alimentation limitée à 30mA disjontait immédiatement.  [...]

[Biologie Moléculaire] CT variable

j'ai eu du signal pour presque toutes les dilutions, les résultats de validation d'amorce que j'ai sont loin d'être satisfaisant du fait que les ct sortent de manière désordonné et très variable, c'est a dire vu que j'ai un facteur de dilution de 2 je devrais avoir deux ct de différence entre chaque dilution, et plus la concentration en ADN initiale est élevé plus le ct sort plus tôt.  [...] déja l'intensité de fluo varie en fonction de l'étape du cycle, mais si tu prend l'intensité de fluo uniquement à l étape ou les brins sont hybridé, alors tu n'est pas censé avoir de baisse puisque ca reviendrai a dire que tu as perdu de l'ADN si tu as moins d'intensité qu'au cycle precedent (comme on peut le voir pour les cycles 10, 13, 14, 15, 19 sur ton graphe.  [...]

[Biologie Moléculaire] gel ADN stress

NB (et à garder en tête). quand on fait une PCR classique, l'intensité des bandes reflètent en général la quantité d'ADN amplifié mais ce n'est pas strictement vrai et il ne faut pas conclure qu'on a plus ou moins d'ADN.  [...] seulement c'est pourquoi obtient on des bandes pas très intense avec le témoin et des bandes bien intense avec les stressés et parfois chez d'autres variétés c'est l'inverse.  [...]

[Biologie Cellulaire] Résultat typique de FACS pour étudier le cycle cellulaire avec l’iodure de propidium

Bonjour, je n'arrive vraiment pas à comprendre ce genre de graphique, comment justifiez l'identification de chaque phase du cycle cellulaire en fonction de l'intensité de la fluorescence Capture.PNG.  [...] De plus, pour moi l'intensité de fluorescence n'est pas proportionnelle à la quantité d'ADN. Sinon, pourquoi expliquer un pic si énorme en G0 ou G1, et non après la phase S, en G2/M où la quantité d'ADN est doublée.  [...]

réaction Glucose /GOx

On a fait un TP, dans le lequel on a mis en présence du glucose, de la glucose oxydase (dans une solution tampon). On a fait une mesure électrochimique de l'évolution de l'intensité en fonction du temps.  [...] Et pour calculer la quantité d'H202 qui réagit pendant une impulsion, quelle est la démarche (réaction de Cottrell tableau d'avancement en couplant toutes les réactions ).   [...]

[Biotechnologie] Electrophorèse capillaire

J'ai extrait l'ADN de plusieurs plantes et effectué une PCR RAPD sur ces ADN. Ensuite j'ai réalisé une électrophorèse capillaire. Arrivé à cette étape, je ne comprends pas comment les molécules d'ADN sont séparées vu qu'elles sont toutes chargées négativement.  [...] Le pH du tampon utlisé est de 8 donc d'après ce que j'ai lu le flux électro-osmotique est maximal et entraîne tout vers la cathode. Je pensais avoir une séparation en fonction du temps mais l'électrophorégramme que j'obiens m'indique l'intensité des pics en fonction des paires de bases.  [...]

mesure de l'expression d'un gene

John, ta remarque est tres pertinente. En effet la stabilite de l'ARNm est un parametre interessante. Mais generalement quand on parle de taux d'expression, c'est que l'on parle du taux de transcription. La question physiologiquement plus interessante serait de se demander le taux d'expression d'une proteine.   [...] Pour en revenir à une puce à ADN, il me semble que ça ne donne jamais que oui ou non il y avait présence de l'ARN dans une condition A, B... et ça dit suivant l'intensité du spot, il y en a +/-.  [...]

Sybr safe

juste une ptite question technique un peu bête. vous est il déjà arrivé en utilisant du sybr safe pour un gel d'agarose, de voir le signal disparaitre au bout d'un long temps de migration (et non parce que les echantillons ont migrés dans le tampon...).  [...] J'utilise pas ce kit, mais avec le Bromure d'ethidium ça peut arriver pour une raison très simple. il migre dans le sens contraire par rapport à l'ADN Donc après une longue migration, pour des petits fragments (de l'ordre de 100 pb) ça m'est dèjà arrivé de perdre un peu d'intensité.  [...]

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

Les brins d'ADN et surtout ceux d'ARN sont très fragile, d'où l'utilisation de solution tampon pour éviter tout changement de pH pouvant ainsi casser la molécule ainsi pour avoir un pH qui sera optimum à l'action de la Taq Polymérase.  [...] Pour ce que tu nous raconte, il s'agit de PCR quantitatives où grosso modo il y a incorporation d'un element fluo pendant l'élongation (pour un type de qPCR donné) la détection s'effectue grace à un lazer qui va quantifier l'intensité de fluo qui augmente avec la quantité d'ADN.  [...]