• Forum - ADN, Souche, Enzyme

[Microbiologie] hybridation moléculaire

je veux savoir également comment je pourrais discuté les résultats de cette hybridation moléculaire (ADN-ADN)afin de montrer la localisation chromosomique de gene de resistance bla lut.(la figure ci-joint).la premiere photo c'est un profil électrophorèse en champ pulsé (PFGE) de l'ADN de la souche Pseudomonas luteola digeré avec l'enzyme I-CeuI.  [...] Weill Fabre, Anne Le Fleche, Richard Bonnet and François-Xavier Benoît Doublet, Frédéric Robin, Isabelle Casin, Laëtitia.Molecular and Biochemical Characterization of the Natural Chromosome-Encoded Class A -Lactamase from Pseudomonas luteola.ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Jan. 2010, p. 4551.   [...]

[Microbiologie] banque génomique

triction Eco RI, Eco RV et Pst I. le plasmide ou vecteur d'expression (pBlueScript) a été également traité par les mêmes enzymes. lig+transformation+criblage par pcr. je suis arrivée au séquençage. mon encadreur qui a vu la sé-.  [...] quence obtenue m'a informé que j'ai effectué une erreur lors de la digestion enzymatique. Je ne suis pas d'accord avec elle parce que je me suis dit que les amorces que j'ai pris sont spécifiqUES DU Gène Mm14 de la souche en question, mais je me suis dit que c'est en rapport avec le clone recombinant que j'ai obtenu (ADN digéré par Eco RV).  [...]

Dénaturation de l'adn en pH acides

Pas necessairement, souvent n'importe quelle enzyme de restriction coupera n'importe quel ADN genomique. Cependant il y a certaines limites. Par exemples.  [...] - Une enzyme ne coupera pas l'ADNg de la souche productrice parce que ce dernier est methyle specifiquement pour empecher la coupure.  [...]

Génie génétique

Afin de caractériser au niveau moléculaire la mutation hisD984, les ADN des souches LT2 ( souche sauvage d origine) et TR6238 ( souche LT2 modifiée contenant la mutation hisD984 après mutagénèse chimique) sont préparés et digérés séparément par différentes enzymes de restriction.  [...] ta sonde radioactive est ton M13Hol76. Il s'agit surement de portion d'ADN radioactif purifié. Elle est sans doute introduit dans ton produit de digestion avant de le faire migrer. Dans la logique, cette sonde se liera uniquement à ta souche sauvage.  [...]

[Biologie Moléculaire] souche d'expression

Je voudrais savoir comment différencie t-on une souche d'expression d'une souche d'amplification de l'ADN.  [...] par exemple. BL21 je sais que c'est plutôt une souche d'expression, XL1b une souche d'amplification d'ADN.  [...]

[Biotechnologie] Fragilisation d'une paroi de champignon

j'essaie d'extraire l'ADN des spores de ma petite bete mais rien y fait donc s'il y a des gens qui pourrait me donner des pistes plutot enzymatiques pour fragiliser voir détruire la paroi d'une spore de champignons je suis préneuse.  [...] en effet ça serais plus simple mais cette souche est difficile à faire germer il faut environ 2 à 3 mois pour qu'elle germe d'où l'intéret de pouvoir récuperer son ADN avant qu'elle germe. Je sais bien que le risque de dégradation de l'ADN est important en utilisant des enzymes mais je pense que c'est une bonne solution.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation courbe qPCR

Après l'enzyme Taq utilisée dans le Sybr green est issue d'une souche bactérienne, c'est peut-être pour ça qu'il y a une amplification. Je vais faire plus de biblio à ce sujet, pour savoir à partir de quelle souche l'enzyme est extraite.  [...] Avec les anciens produits de PCR, j'obtiens 2 pics, avec de nouveaux produits je n'en ai plus qu'un (un peu moche certes, mais un seul). Nous en concluons que la contamination devait provenir de l'eau miliQ, la piste des dimères est définitivement écartée, et je repasse tous mes échantillons avec de l'eau propre, aliquotée et congelée. Enjoy.   [...]

[Microbiologie] dégradation de l'ADN

1) j'ai constaté que L'adn de la Mycoplasma se dégrade rapidement, j'ai respecté le protocole d'extraction de l'adn mes réactifs sont en bon état je soupçonne l'interférence de la mutation de la souche dans ça est il possible de considérer que les mutations et/ou la présence d'une activité exonucléasique chez la souche soient impliqués dans la dégradation de l'ADN.  [...] merci d'avoir répondu à mes questions, mais maintenant on doit se focaliser sur la dégradation D'ADN presque tous mes collègues rencontrent le même problème pour la souche Mycoplasma meleagridis sachez qu'on travaille dans les normes, je ne sais pas franchement à quoi est dû spécialement pour cette espèce, je me suis posée la question % à la présence de Dnase mais si c'étais le cas ça ne marcherait pas pour toutes les espèces aidez moi s'il vous plaît sachant qu'on utilise la méthode d'extraction d'adn au phénol chloroforme.  [...]

[Divers] Contenu "Matériels et méthodes" - rapport stage M1

Le gene xyz a ete amplifie a partir de l'ADN de la souche abc en utilisant les amorces A (3'sequence5') et B (3'sequence5'). Le produit PCR a ensuite ete purifie par le kit XXX (XXX, France) puis digere par les enzymes bamHI/EcoRI avant d'etre clone dans le plasmide xxx prealablement linearise par les memes enzymes.  [...] J'ai mis mes oligos dans un tableau avec les séquences et commentaires pour dire quel oligo apporte quoi dans l'histoire et j'ai fait un schéma où je les positionne sur les gènes. Le truc est que j'avais séparé mon M&M en 3. Souches bactériennes, plasmides, milieux de culture, Manipulation de l'ADN (tout ce qui est PCR), Construction des plasmides recombinants et je pensais ajouter une 4e partie Séquençage, mais là quand j'y pense, ça me paraît plus logique de le mettre dans Manipulation de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Petites questions autour de l'extraction d'ADN plasmidique !

On nous a fait aussi fait faire une électrophorèse avec dans un puit l'ADN plasmidique de la première souche et dans un autre puit, l'ADN plasmidique de la deuxième souche. On nous demande d'analyser ce résultat.  [...] Pour en avoir déjà fait l'expérience, la transfo ou les PCR avec des ADN purifiés dans lesquels il reste trop de solvant ca marche moyen (le solvant gène voire inactive les enzymes).  [...]