• Forum - ADN, Sonde, Hybridation

Hybridations plasmides et sondes

Le reel clonage se situe en amont de la premiere manip. Il correspond en fait a une manipulation de l'ADN (en vue de l'insertion dans un plasmide par exemple). Evidemment, suite a ton clonage tu auras besoin de transformer des bacteries puis de verifier ton clonage (manip 1, 2 et 3).  [...] oui j'entendais plus propre dans la mesure ou on ne fait pas tremper les bactérie dans un milieu agressif et qui dégrade les membranes c'est tout. Et il me semble que la quantité intégrable dans un phage est assez restreinte du fait de la taille maximum d'encapsidation.   [...]

Hybridation in situ

La sonde peut s'hybrider de façon aspécifique sur l'ADN. Si l'on ne fait rien alors cette hybridation donne du bruit de fond.Le but du de l'ADN de saumon (on utilise celui ci parce que le saumon pond beaucoup d'oeuf, du coup on peut en avoir beaucoup rapidement) est de capter les hybridations aspécifiques.  [...] C'est juste que ta sonde peut se fixer sur des sites aspécifiques. Si le nombre de site aspécifique du à l'ADN de saumon est superieur au nombre de sites andogènes alors la probabilité qu'une hybridation aspécifique se fasse avec l'ADN de saumon est plus grande que celle qu'elle se fasse avec du matériel endogène.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

ADNg digéré par HindIII + hybridation sonde H. on obtient un signal d'hybridation de 0,3Kb.  [...] Or notre sonde N d'ADNc de 1Kb (je rappelle NcoI/NcoI) ne possède pas de site de restriction pour HindIII donc il existe un site de restriction pour HindIII dans l'intron de 0,8Kb.  [...]

[Biologie Moléculaire] détection de gènes multicopies

Tout d'abord j'avais penser faire une digestion de mon adn, puis faire migrer, suivi d'une hybridation avec une sonde radioactive et j'aurais alors pu voir si une ou plusieurs bandes s'allumaient. Malheureusement cette technique nécessite une grande quantité d'adn que je n'ai pas.  [...] Pour le principe de la FISH interphasique et bien déjà on peut la faire sur n'importe quel tissu. On dénature la lame avec le matériel génétique et les sondes puis il y a hybridation des sondes spécifiques du gène en question (locus spécifique) sur l'ADN simple brin (en parallèle on contrôle les conditions dénaturantes et la température).  [...]

[Biologie Moléculaire] marquage à la digoxigènine

mon pb se situe au niveau de l'hybridation de ma sonde avec de l'adn fixé sur une membrane.  [...] JE cherche à savoir la composition du tampon d'hybridation. Sur le site de roche il me conseil d'utiliser le leur ce qui est commercialement normal et il me donne 3 compositions différentes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutations et Southern Blot

Le southern est effectué pour analyser une partie du génome et ses modifications éventuelles. Il est fait avec de l'ADN génomique que l'on a fait digérer par EcoR1, et on a hybridation avec une sonde radioactive synthétisée par l'ADNc et on compare les distances de migration avec des fragments de tailles connues qui servent de marqueurs de taille.  [...] - l'EP me gène. Même s'il n'a pas de site EcoRI il peut perturber le site d'hybridation de ta sonde non Dans ce cas là tu auras un résultat négatif, qui se confond avec le résultat de la délétion du gène.  [...]

[Biologie Moléculaire] absence d'hybridation southern : interpretation?

Sinon a moins d'un probleme purement technique je ne vois pas pourquoi ta sonde s'hybride pas. Mais peut etre qu'en précisant un peu le but exact du tp on aurait plus de piste.  [...] - typiquement l'absence de signal pourrait indiquer qu'il y a eut un rearrangement chromosomique et que la partie correspondante a ta sonde a disparu. Ou plus simplement une délétion de la région concernée.  [...]

[Biologie Moléculaire] probleme avec ma PCR

Je dispose d'ADN dans lequel je dois amplifier un gene particulier. Disons A. Apres plusieurs PCR je n'ai aucun resultat. Alors que quand je transfert cet ADN sur membrane et que je fais une hybridation, j'ai des signaux. Ma sonde est le gene que je cherche mais amplifie avec un control positif.  [...] Si j'ai des signaux apres hybridation,c'est que dans mon ADN il ya une sequence homologue au gene A. Mais pourkoi avec la PCR je n'arrive pas a amplifier. Mon ADN est pur et l'amorce fonctionne bien puisqu'elle amplifie bien avec le control positif.  [...]

[Génétique] Sondes de Southern Blot et complémentation

Il était effectivement implicite dans ma réponse que je ne considère qu'un fragment d'ADNc comme sonde, de façon à hybrider une séquence qui correspond à un exon (éviter qu'elle soit à cheval entre deux exons et donc pas hybridable à l'ADNg).  [...] En moyenne, il me semble qu'une sonde fait 100 à quelques centaines de nucléotides de longueur. Si tu veux détecter la présence d'un gène qui fait 3000 kb, avec un ADNc qui ferait par exemple 2000 nt, c'est bien trop long. Réduire la taille te permet une meilleure hybridation... et d'être intraexonique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dot Blot

on prend l'ADN d'un patient qu'on pense atteint d'une mutation connue et on fait une hybridation avec deux sondes.  [...] °si on a un juste un spot avec l'hybridation de la sonde normale et aucun avec la mutée, le patient ne portera pas la mutation (il sera homozygote sain).  [...]